Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse Anti-Human CD42b, Platelet Glycoprotein lb, Klon AN51
Nr kat. F 0802
Nr kat. R 7014
Przeznaczenie
FITC-Conjugated
RPE-Conjugated
Do diagnostyki in vitro.
F 0802 oraz R 7014 przeznaczone są do użycia w cytometrii przepływowej. Interpretacji wyników może
dokonywać osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu chorobowego i innych badań diagnostycznych.
Synonim antygenu
Glycoprotein Iba (GPIba), Glycoprotein IbGPIb i Glycocalicin (1).
Wstęp
CD42b jest białkiem o masie cząsteczkowej 145 kDa, które wraz z CD42c o masie 160 kDa tworzy
heterodimer zawierający łańcuchy i Podjednostka ta jest łączona poprzez wiązanie dwusiarczkowe. CD42b
oraz CD42c tworzą niekowalentny kompleks razem z CD42a i CD42d w błonie komórkowej płytek. Kompleks
CD42 jest receptorem dla czynnika von Willebrand’a oraz trombiny a także uczestniczy w adhezji płytek do
macierzy subendotelialnej (powstającej po zniszczeniu endotelium). Nieobecność kompleksu CD42 powoduje
powstawanie zespołu Bernard-Soulier. Część wiążąca dla czynnika von Willebrand’a oraz trombiny znajduje się
na fragmencie CD42b (1).
Odczynnik dostarczony
Przeciwciała Anti-CD42b sprzężone z fluorochromami F 0802 oraz R 7014, są produkowane z oczyszczonych
monoklonalnych mysich przeciwciał. Przeciwciała te dostarczane są w postaci płynnej w buforze zawierającym
1% albuminy surowicy wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. Każde opakowanie wystarcza na 100
testów (10 L konjugatu na 106 płytek krwi z normalnej krwi obwodowej człowieka).
Izotyp: IgG2a, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz etykietka na opakowaniu.
Przeciwciało
Nr kat.
Fluorochrom
Kontrola
Negatywna
Nr kat.
F 0802
FITC (Izomer 1 izocjanianu fluoresceiny)
X 0933
R 7014
RPE (R-Fytoerytryna)
X 0950
Immunogen
Mieszanina ludzkich płytek krwi oraz limfocytów. (2)
Swoistość
Anti-CD42b, AN51,został zaprezentowany na Fourth International Workshop and Conference on Human
Leucocyte Differentiation Antigens (3). Anti-CD42b, AN51, jest zdolny do blokowania domeny wiążącej czynnik
von Willebrand’a w łańcuchu CD42b (4) oraz hamuje indukowaną adrenaliną agregację płytek (5).
Anti-CD42b, AN51, jest wydzielane na megakariocytach oraz płytkach krwi (2).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Procedura barwienia
Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na
opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić
jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z
próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez
zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako.
1. Pobrać krew żylną do próbówki z EDTA jako antykoagulantem.
2.
Przed upływem 5 minut od pobrania odwirować w temperaturze pokojowej przez 5 minut przy 200 x g.
3.
Zebrać 100 L plazmy wzbogaconej w płytki (warstwa górna) i zmieszać z 1 ml 0.01 mol/L PBS, pH 7.4.
Inkubować w 4 C przez 30-60 minut.(tak przygotowana próbka wystarcza na 20 badań).
4.
Odwirować w temperaturze pokojowej przez 5 minut przy 1200 x g. Dokładnie zebrać pipetą supernatant
pozostawiając ok. 50l zawiesiny.
5.
Dodać 2 mL 0.01 mol/L PBS, pH 7.4, i ponownie zawiesić płytki używając mieszadło typu „vortex.
6.
Odwirować w temperaturze pokojowej przez 5 minut przy 1200 g. Dokładnie zebrać pipetą supernatant
pozostawiając ok. 50l zawiesiny.
7.
Dodać 1 mL 0.01 mol/L PBS zawierającego 2% płodowej surowicy cielęcej i ponownie zawiesić płytki
używając mieszadło „vortex”.
8.
(110715-002)
Zmieszać 50 L zawiesiny płytek z 10 L koniugatu fluorochromowego Anti-CD42b
F 0802/R 7014/PL/MBH/01.09.02 str 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
9.
Użyć niereaktywnego monoklonalnego przeciwciała o identycznym izotypie, skoniugowanego z tym
samym fluorochromem jako kontroli negatywnej (patrz tabela)
10.
Inkubować w ciemności w temperaturze 4oC przez 20 minut.
11.
Płukać dwa razy z PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie zawiesić płytki w płynie odpowiednim do cytometrii
przepływowej np. 0.3 mL 0.01 mol/L PBS, pH 7.4.
12. Wykonać analizę na cytometrze przepływowym.
Zaleca się wykonanie kontroli negatywnej i pozytywnej równolegle z przygotowaniem badanych próbek.
Należy także zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło w
czasie całej procedury przygotowania i analizy.
Ograniczenia specyficzności
Produktu
Intensywność fluorescencji tego przeciwciała jest zredukowana po dodaniu 1%paraformaldehydu.
Dodatek paraformaldehydu po reakcji z przeciwciałem będzie zmniejszać intensywność sygnału fluorescencji.
Literatura
1.
de Haas M, von dem Borne A. CD42b. CD Guide. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin
C, Clark E, et al., editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th
International Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford
University Press Inc.; 2002. p. 787-788.
2.
McMichael AJ, Rust NA, Pilch JR, Sochynsky R, Morton J, Mason DY, et al. Monoclonal antibody to
human platelet glycoprotein I. I. Immunological studies. Br J Haematol 1981;49:501-9.
3.
CD 42b. Appendix A CD Guide. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al.,
editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International
Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1989. p 1085.
4.
Fauvel-Lafève F, Tabaka V, Caen JP, Legrand YJ. Defective adhesion of blood platelets to vascular
microfibrils in the Bernard-Soulier syndrome. Blood 1993;82:1985-8.
5.
Mustonen P, Lassila R. P8.14 Adrenaline-induced platelet aggregation is inhibited by AN51 (DAKO-Ib), a
murine mAb to human platelet gpIb (CD42b). In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM,
Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford,
New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume 2. p. 1338-9
Objaśnienia symboli
(110715-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed silnym światłem
(sprawdź w zasadach
przechowywania)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 0802/R 7014/PL/MBH/01.09.02 str 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17