Specsheet Template CE

MultiMix™
Triple-Colour Reagent
Anti-Human CD4/FITC
Anti-Human CD8/RPE
Anti-Human CD3/RPE-Cy5
Nr kat. TC654
Cel użycia
Tylko do diagnostyki in vitro.
TC654 jest przeznaczony do diagnostyki przy wykorzystaniu cytometrii przepływowej. Pozwala on
jednoczasowe na wykrywanie i oznaczanie liczby komórek T (CD3+), komórek supresorowo/cytotoksycznych
(CD8+) oraz komórek T pomocniczych (CD4+) (1, 2, 3).
Interpretacja uzyskanych wyników musi być wykonana przez wykwalifikowany personel medyczny, przy
uwzględnieniu obrazu klinicznego (dane z historii choroby pacjenta) oraz wyników innych testów
diagnostycznych
Odczynniki
TC654 to trzy starannie dobrane fluorescencyjne odczynniki zawierające przeciwciała:
Mysie monoklonalne antyludzkie przeciwciało CD4, Clone MT310, sprzężone z izomerem 1 izotiocyjanianu
fluoresceiny (FITC).
Mysie monoklonalne antyludzkie przeciwciało CD8. Clone DK25, sprzężone z R-fitperytryną (RPE).
Mysie monoklonalne antyludzkie przeciwciało CD3, Clone UCHT1, sprzężone z R-fitoerytryno-cyjanianem 5
(RPE- Cy-5).
Trzy koniugaty obecne w TC654 wyprodukowano z mysich przeciwciał podklasy IgG1, kappa. Postać płynną
TC654 zawieszono w buforze zawierającym 1% roztwór albumin surowicy bydlęcej (BSE) oraz 15 mmol/L
NaN3, o pH 7.2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 L koniugatu na 106 leukocytów prawidłowej ludzkiej krwi
obwodowej).
Specyfikacja
Przeciwciało
Nr Kat.
Fluorochrom
Nr kat. odczynnika
kontrolnego
TC654
FITC, RPE and RPE-Cy5
X0956
Anti-CD4, MT310, wprowadzono na Drugiej edycji International Workshop and Conference on Human Leucocyte
Differentiation Antigens i przebadano w wielu laboratoriach, aby potwierdzić wchodzenie w reakcję z antygenem
CD4 (1).
Anti-CD8, DK25 jest odpowiednikiem CD8-clustered antibodies OKT8 i Leu-2a (2).
Anti-CD3, UCHT1 wprowadzono na Pierwszej i Trzeciej edycji International Workshops and Conferences on
Human Leucocyte Differentiation Antigens i przebadano w wielu laboratoriach, aby potwierdzić wchodzenie w
reakcję z CD3 (3).
Anti-CD3, UCHT1, reaguje z łańcuchem  CD3 o masie cząsteczkowej 20 kDa (4).
Środki ostrożności
1. Do użytku tylko przez wykwalifikowanych pracowników laboratoriów.
2. Produkt ten zawiera azydek sodu (NaN3), który w czystej formie jest wysoce toksyczny,. Azydek sodu nie
jest obecny w stężeniu toksycznym w tym produkcie, ale może on reagować z ołowiem i miedzią w instalacjach
wodociągowych tworząc bardzo wybuchową mieszaninę azydków metali. Usuwanie resztek odczynnika ze
sprzętu powinno odbywać się z użyciem dużą ilości wody, aby zapobiec tworzeniu się azydków metali.
3. Konieczne jest przestrzeganie prawidłowej procedury postępowania, tak jak w każdym innym przypadku
używania produktu pochodzenia organicznego.
Sposób przechowywania
Przechowywać w temperaturze 2-8C. Nie używać po upływie terminu ważności wyznaczonym na etykietce.
Jeżeli odczynniki są przechowywane w innych warunkach niż te wymagane, należy bezwzględnie zmienić je
stosownie do zaleceń. Nie ma żadnych oczywistych dowodów wskazujących na nietrwałość tego produktu.
Niemniej jednak przed każdorazowym użycie do badań diagnostycznych próbek pochodzących od pacjentów,
należy przeprowadzić kontrolę pozytywną jak i negatywną. W przypadku wystąpienia niespodziewanych
problemów, których nie można wytłumaczyć błędami w procedurze laboratoryjnej a równocześnie pojawi się
podejrzenie, że przyczyną tego jest jakość przeciwciała należy skontaktować się z naszym działem
technicznym.
Wykonanie odczynu
1.
Przenieść 100 µL krwi z dodatkiem środka przeciwzakrzepowego (EDTA) do probówki polistyrenowej
o wymiarach 12 mm x 75 mm.
2.
Dodać 10 µL TC654 i ostrożnie wymieszać mieszadłem wibracyjnym.
3.
Inkubować probówkę w ciemności przez 30 minut w temperaturze 2–8 °C lub przez 15–30 minut
w temperaturze pokojowej (20–25°C).
4.
Dodać do probówki 100 µL odczynnika Uti-Lyse™ Reagent A (nr kat. Dako S3325) i delikatnie mieszać
mieszadłem wibracyjnym. Inkubować probówkę przez 10 minut w temperaturze pokojowej,
w ciemnym pomieszczeniu.
5.
Dodać do probówki 1 mL odczynnika Uti-Lyse™ Reagent B (nr kat. Dako S3325) i delikatnie mieszać
mieszadłem wibracyjnym. Inkubować probówkę przez 10 minut w temperaturze pokojowej,
w ciemnym pomieszczeniu.
(108790-003)
TC654/PL/MTH/09.03.05 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
6.
Odwirować probówkę przy 300 x g przez 5 minut. Delikatnie odciągnąć supernatant i odrzucić go,
pozostawiając w probówce około 50 µL cieczy.
7.
Dodać do probówki 2 mL PBS (nr kat. Dako S3024) i odtworzyć zawiesinę komórek za pomocą mieszadła
wibracyjnego.
8.
Powtórzyć etap 6.
9.
Odtworzyć zawiesinę komórek w odpowiednim płynie do cytometrii przepływowej, np. 0,3 mL PBS.
10.
Poddać próbkę analizie w cytometrze przepływowym lub przechowywać do analizy w ciemności i
temperaturze 2–8°C. Próbki powinny zostać poddane analizie przed upływem 24 godzin od barwienia.
Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromowe są wrażliwe na światło, w związku z czym w trakcie wykonywania
odczynu i do wykonania analizy próbki powinny być chronione przed światłem.
Uwagi dotyczące procedury
Etap 1: Opcjonalnie do każdego pomiaru można dołączyć odpowiednie dodatnie i ujemne próbki kontrolne w celu
weryfikacji odczynnika i przygotowania próbek.
Etap 2: Zalecana objętość koniugatu jest jedynie wartością orientacyjną. Optymalne warunki barwienia mogą się
zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w
każdym laboratorium.
Uwzględnienie probówki z odczynnikiem kontrolnym jest opcjonalne. Odczynnik kontrolny powinien być
dopasowany do izotypów i fluorochromów sprzężonego przeciwciała. Zalecanym trójbarwnym odczynnikiem
kontrolnym dla TC654 jest odczynnik Dako o numerze kat. X0956.
Etapy 4 i 5: Jeśli używany jest inny odczynnik do lizy komórek, należy przy jego doborze kierować się
poniższymi zaleceniami. Należy zauważyć, że jeśli alternatywny odczynnik do lizy nie zawiera utrwalacza (np.
Dako EasyLyse™, nr kat. S2364) PBS w kroku 9 powinien zawierać 1% paraformaldehydu, chyba że próbka
zostanie przeanalizowana w czasie zalecanym dla odczynnika do lizy.
Etap 10: W przypadku niektórych chorób można oczekiwać nieprawidłowej ilości komórek, w których zachodzi
ekspresja antygenu docelowego, lub nieprawidłowego poziomu ekspresji antygenu. Może to wywołać zmianę
wzorca odczynu. Do przeprowadzenia właściwej analizy konieczna jest znajomość prawidłowego wzorca ekspresji
antygenu oraz jego związków z ekspresją innych istotnych antygenów.
Odczynniki wielobarwne lepiej niż jednobarwne nadają się do kompleksowej analizy próbek w cytometrii
przepływowej. W analizach wielobarwnych szczególne znaczenie ma odpowiedni dobór kompensacji koloru.
Charakterystyczne
ograniczenia produktu
Piśmiennictwo
Zaobserwowano barwienie tła w wyniku łączenia się koniugatów RPE-Cy5 z monocytami (5).
1. Miedema F, Terpstra FG, Melief CJM. T cell-dependent immunoglobulin synthesis in the human system.
Studies with T cell-specific monoclonal antibodies. In: Reinherz EL, Haynes BF, Nadler LM, Bernstein ID,
editors. Leukocyte typing II. Proceedings of the 2nd International Workshop on Human Leukocyte
Differentiation Antigens; 1984 Sept 17-20; Boston, USA. New York, Berlin, Heidelberg, Tokyo: SpringerVerlag; 1986. Volume I. p. 213-22.
2. Stein H, Lennert K, Feller AC, Mason DY. Immunohistological analysis of human lymphoma: correlation of
histological and immunological categories. Adv Cancer Res 1984;42:67-147.
3. McMichael AJ, Gotch FM. T-cell antigens: new and previously defined clusters. In: McMichael AJ, Beverley
PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sept 21-26;
Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p.31-62.
4. Tunnacliffe A, Olsson C, Traunecker A, Krissansen GW, Karjalainen K, de la Hera A. T3.2. The majority of
CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt
RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th
International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo:
Oxford University Press; 1989. p. 295-6.
5. van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkel JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human
high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61.
Znaczenie symboli
(108790-003)
Numer katalogowy
Przechochywać w
temperaturze
Zużyć przed
Produkt do diagnostyki
medycznej in vitro
Przechowywać z dala od światła
słonecznego sprawdziwszy wcześniej
przydatność tego miejsca
Producent
Przeczytaj instrukcję przed
użyciem
Numer serii
TC654/PL/MTH/09.03.05 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17