Monoclonal Mouse Anti-Human CD79αcy/APC, Klon HM57

Monoclonal Mouse Anti-Human CD79α
αcy/APC, Klon HM57
Monoclonal Mouse Anti-Human CD79α
αcy/RPE, Klon HM57
Przeznaczenie
Nr katalogowy C7252
Nr katalogowy R7159
Do badań diagnostycznych in vitro.
Produkty o nr kat. C7252 i R7159 są przeznaczone do stosowania w cytometrii przepływowej. Przeciwciało
CD79 jest uważane za antygen pan-limfocytów B, powszechnie stosowane w analizie nowotworów Bkomórkowych (5). Interpretacji wyniku — z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod
diagnostycznych — powinien dokonać wykwalifikowany patolog.
Synonimy antygenu
Ig α, IgM−α, MB1 (4, 6)
Streszczeniei informacje
ogólne
Polipeptyd CD79α tworzy wraz z polipeptydem CD79β, przezbłonowy heterodimer połączony mostkami
dwusiarczkowymi niekonwalencyjnie związany z immunoglobulinami związanymi z błoną na komórkach B
(1, 4). Te trzy komponenty tworzą kompleks receptorowy antygenów komórek B. Wiązanie antygenu przez
immunoglobulinę w tym
kompleksie prowadzi do transdukcji sygnału za pośrednictwem
CD79α/CD79β powodując aktywację wielu ścieżek biochemicznych (4). Zatem dimer CD79α/CD79β może być
uważany za B-komórkowy odpowiednik CD3 na komórkach T (1). Masa cząsteczkowa CD79α i CD79β wynosi
odpowiednio 32-33 kDa i 37-39 kDa,a ich determinanty cytoplazmatyczne posiadają następujące nazwy:
CD79αcy i CD79βcy (2).
Ekspresja CD79α w normalnych komórkach jest ograniczona do linii komórek B. W cytoplazmie limfocytów
pro-B wykrywany jest CD79αcy przed przegrupowaniem ciężkiego łańcucha Ig i zanika w terminalnie
zróżnicowanych komórkach plazmatycznych. Ekspresja CD79α występuje w białaczce włochatokomórkowej
oraz w większości białaczek i chłoniaków linii B niskiego stopnia takich, jak chłoniak limfoplazmocytowy,
chłoniak grudkowy, chłoniak z komórek płaszcza, chłoniak strefy brzeżnej i chłoniak Burkitta. Powszechnie
antygen CD79α nie jest wykrywany w ostrej białaczce szpikowej, lecz klasa FAB M3 stanowi istotny wyjątek z
ponad 50% przypadków wykazujących antygen w cytoplazmie komórek złośliwych. Około 45% przypadków
ostrej białaczki limfoblastycznej linii T (ALL) wykazuje ekspresję CD3 i CD79α i taki fenotyp współekspresji
może mieć istotne znaczenie kliniczne (4).
Odczynnik dostarczony
Anti-CD79αcy, koniugaty, C7252 i R7159 zostały wyprodukowane z oczyszczonego mysiego przeciwciała
monoklonalnego. Koniugaty są dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy
bydlęcej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3 o pH 7,2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 µL koniugatu
przeznaczone jest dla maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
Przeciwciało
nr kat.
Fluorochrom
Kontrola ujemna
nr kat.
R7159
RPE (R-Phycoerythrin)
X0928
C7252
APC (Allophycocyanin)
X0968
Immunogen
Sekwencja syntetycznego peptydu obejmująca aminokwasy 202-216 białka CD79α. Ten oligopeptyd stanowi
wewnątrzcytoplazmatyczną część C-terminalną białka (1,3).
Swoistość
Przeciwciało HM57 zostało określone jako Anti-CD79αcy podczas Piątych Międzynarodowych Warsztatów pod
nazwą: Ludzkie Antygeny Różnicowania Leukocytów (Fifth International Workshop on Human Leucocyte
Differentiation Antigens), w Bostonie w 1993 r. (2). W skrawkach tkanek Anti-CD79αcy, HM57 znakuje komórki
B pochodzące od kilku gatunków ssaków, tj. cieląt, świnek morskich, koni, małp, myszy, szczurów i świń (1).
W normalnych tkankach przeciwciało Anti-CD79αcy, HM57 wykrywa CD79α w komórkach ograniczonych do
linii komórek B. Obecność CD79αcy można wykryć za pomocą przeciwciała Anti-CD79αcy, HM57, w białaczce
włochatokomórkowej oraz w większości białaczek i chłoniaków linii B niskiego stopnia takich, jak chłoniak
limfoplazmocytowy, chłoniak grudkowy, chłoniak z komórek płaszcza, chłoniak strefy brzeżnej i chłoniak
Burkitta (4).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(107826-002)
C7252/R7159/PL/ROP/13.09.06 s. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temp. 2-8 °C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na
etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi
zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi
nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje
podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem
Pomocy Technicznej naszej firmy.
Procedura barwienia
1.
Przenieść 50 µL (do 106 komórek) zawiesiny komórek badanych (komórki pełnej krwi, szpiku kostnego
lub jednojądrzaste) do probówki.
2.
Dodać 100 µL odczynnika Dako IntraStain Reagent A (Fixation), nr kat. K2311. Delikatnie wymieszać
używając wytrząsarki – aby powstała jednorodna zawiesina komórek.
3.
Inkubować w temperaturze pokojowej przez 15 minut.
4.
Dodać 2 mL zbuforowanego roztworu soli fizjologicznej (PBS) i delikatnie wymieszać przy pomocy
wytrząsarki.
5.
Wirować 300 x g przez 5 minut następnie zassać supernatant pozostawiając około 50 µL płynu.
6.
Dokładnie wymieszać stosując wytrząsarkę, aby uzyskać zawiesinę komórek i dodać 100 µL Dako
IntraStain Reagent B (Permeabilization), nr kat. K2311. Dodać 10 µL przeciwciała Anti-CD79αcy
skoniugowanego z fluorochromem. Delikatnie wymieszać przy pomocy wytrząsarki, aby uzyskać
jednorodną zawiesinę komórek.
7.
Jako kontrolę ujemną zastosować niereaktywne przeciwciało monoklonalne tego samego izotopu,
skoniugowane z tym samym fluorochromem (patrz: tabela).
8.
Inkubować w ciemnym miejscu w temperaturze pokojowej przez 15 minut.
9.
Powtórzyć etapy 4 i 5.
10.
Ponownie przygotować zawiesinę komórek w płynie odpowiednim dla analizy cytometrycznej, np. w
0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01 mol/L PBS o pH 7,4.
11.
Dokonać analizy przy użyciu cytometru przepływowego.
Dla zapewnienia kontroli odczynników i przygotowania próbek zalecane jest stosowanie podczas każdego testu
odpowiednich próbek kontroli dodatniej i ujemnej. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromu są wrażliwe na
działanie światła, dlatego podczas procedury barwienia i do chwili wykonania analizy należy chronić próbki
przed działaniem światła.
Piśmiennictwo
1.
Mason DY, Cordell JL, Tse AGD, van Dongen JJ M, van Noesel CJM, Micklem K. The IgM-associated
protein mB 1 as a marker of normal and neoplastic B cells. J Immunol 1991;147:2474-82.
2.
Engel P, Wagner N, Tedder TF. B23. CD79 workshop report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W,
Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation
antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA.
Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume 1. p. 667-70.
3.
Cordell JL, Jones M, Brown M, Gatter KC, van Dongen JJM, Mason DY. B23.4. Studies of the mb1
polypeptide - a major new B cell marker. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto
T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the
5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo:
Oxford University Press; 1995. Volume 1. p. 676-7.
4.
Chu PG, Arber DA. CD79: A review. Appl Immunohistochem Mol Morphology 2001;9:97-106.
5.
Verschuren MCM, Comans-Bitter WM , Mason DY, Drexler HG, van Dongen JJM. B23.4. Expression of
mb1 and B29 proteins in human haemopoetic malignancies and cell lines. In: Schlossman SF, Boumsell
L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7;
Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume 1. p. 677-79.
6.
In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, et al., editors. Leucocyte typing VII.
White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International Workshop and Conference; 2000
Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University Press Inc.; 2002. p. 828.
Objaśnienie symboli
(107826-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
C7252/R7159/PL/ROP/13.09.06 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17