Nr kat. IR618

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Cytokeratin 18
Klon DC 10
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR618
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 18, klon DC 10, Ready-to-Use (Link), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało barwi komórki
nabłonkowe zawierające cytokeratynę 18, jest takŜe uŜywane jako narzędzie do róŜnicowania i identyfikacji
nowotworów nabłonkowych (1) i nabłonkowego śródbłoniaka krwionośnego (2). Przeciwciała wobec cytokeratyny 18
mogą być takŜe uŜyteczne do identyfikacji nasieniaków (3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia
musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być
przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Cytokeratyny 18 naleŜą do filamentów pośrednich, tworzących cytkoszkielet w prawie wszystkich komórkach.
W przeciwieństwie do innych filamentów pośrednich, cytokeratyny (CK) naleŜą do rodziny wysoce złoŜonych białek
wielogenowych, o masach cząsteczkowych w zakresie od 40 do 68 kDa. W róŜnych ludzkich komórkach
nabłonkowych (6) wyróŜniono juŜ dwadzieścia osobnych polipeptydów CK (4, 5). MoŜna je podzielić na odmiany
kwaśną (typ I) i obojętno-zasadową (typ II). CK18 o masie 45 kDa naleŜy do odmiany kwaśnej cytokeratyn, która
występuje zwykle w nabłonku prostym; innym niŜ warstwowy. CK18 podlega takŜe ekspresji w komórkach
podstawnych i komórkach powierzchniowych nabłonka przejściowego oraz w kanalikach/komórkach wydzielniczych
nabłonków złoŜonych (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: DC 10 (7). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
PCM 42, linia ludzkiego raka sutka (7).
Swoistość
W testach Western blot prepatatów cytokeratyn z komórek BT 20 przeciwciało znakowało pojedynczy prąŜek o
masie 45 kDa odpowiadające CK18 (7).
W badaniach immunocytochemicznych ludzkich linii komórkowych pochodzących z hodowli przeciwciało znakowało
komórki guza pochodzenia nabłonkowego. Nie wykazano barwienia w prawidłowych fibroblastach i komórkach guza
pochodzenia innego niŜ nabłonkowe, takich jak glejak, nowotwór i kostniakomięsak (7).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(117629-003)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
IR618/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek i materiały
dodatkowe
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy
skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link)
(nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse
(Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują wzór odczynu cytoplazmatycznego.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Z reguły przeciwciało znakuje nabłonek jednowarstwowy i przejściowy w przeciwieństwie do
elementów nabłonka wielowarstwowego. Barwienie dotyczy nabłonka jednowarstwowego jelita, drzewa
oskrzelowego i pęcherzyków układu oddechowego, kanalików nerek, dróg Ŝółciowych, błony śluzowej endometrium i
śluzówki kanału szyjki, nabłonka jajowodu i nabłonka sieci jądra i jajnika. Przeciwciało znakuje takŜe hepatocyty i
zraziki trzustkowe. Ponadto przeciwciało znakuje nabłonek złoŜony gruczołu sutka, ślinianek i potowego, a takŜe
nabłonek przejściowy pęcherza moczowego (7). Znakowane są takŜe komórki nabłonka ozębnej (8). W przypadku
komórek pochodzenia innego niŜ nabłonkowe przeciwciało znakuje komórki nabłonkowe w Ŝyłkach, naczyniach
limfatycznych i włosowatych w tkankach takich jak skóra, podskórna tkanka miękka, mięśnie szkieletowe, łoŜysko i
np. błona śluzowa układu oddechowego, przewodu pokarmowego i dróg rodnych (2). Nie stwierdzono odczynu w
tkankach nabłonkowych, w których wykazano brak CK18, takich jak naskórek, naskórek na podeszwie stopy,
pochwa, błona zewnętrzna szyjki macicy, przełyk i komórki mięśniowo-nabłonkowe (7). W wątrobie komórki
nabłonka przewodu Ŝółciowego wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast błony śluzowe komórek
wątroby wykazują odczyn słaby do umiarkowanego.
Tkanki nieprawidłowe: W guzach trzustki przeciwciało znakowało 6/6 przypadków rakowych komórek zrazikowych,
1/1 przypadek blastomy trzustki, 19/20 przypadków guzów neuroendokrynnych trzustki i 10/19 przypadków guzów
stałych pseudobrodawkowatych (9). Ponadto przeciwciało znakowało 30/30 przypadków dwufazowych, 21/46
przypadków jednofazowych i 8/17 przypadków mięsaków maziówkowych o niskim stopniu zróŜnicowania (10). W
przypadku nowotworów pochodzenia naczyniowego przeciwciało znakowało komórki nabłonkowe w 17/17
przypadków nabłonkowego śródbłoniaka krwionośnego, 9/14 przypadków złośliwego śródbłoniaka krwionośnego
nabłonkowatego, 6/10 przypadków wrzecionowatokomórkowego naczyniaka krwionośnego, 2/7 przypadków
naczyniaka chłonnego, 10/48 przypadków złośliwego śródbłoniaka krwionośnego innego typu niŜ nabłonkowaty,
3/13 przypadków Ŝylnego naczyniaka krwionośnego i 1/18 przypadków naczyniaka krwionośnego naczyń
włosowatych. Nie stwierdzono odczynu w 4 przypadkach jamistego naczyniaka krwionośnego i 6 przypadkach
mięsakach Kaposiego (2). Testowanie przeciwciał na chłoniaka, małych komórkach raka płuc, raka komórek Merkela
i inwazyjnego raka piersi, wykazały reakcję pozytywną.
(117629-003)
Dako Denmark A/S
IR618/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis [review]. Semin Cancer Biol 1990;
1:165–79.
2.
Miettinen M, Fetsch JF. Distribution of keratins in normal endothelial cells and a spectrum of vascular tumors:
Implications in tumor diagnosis. Hum Pathol 2000; 31:1062–7.
3. Fogel M, Lifschitz-Mercer B, Moll R, Kushnir I, Jacob N, Waldherr R, et al. Heterogeneity of intermediate filament expression in
human testicular seminomas. Differentiation 1990;45:242-9.
4.
Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: Patterns of
expression in normal epithelia, tumors and cultured cells [review]. Cell 1982; 31:11–24.
5.
Moll R, Löwe A, Laufer J, Franke WW. Cytokeratin 20 in human carcinomas. A new histodiagnostic marker
detected by monoclonal antibodies. Am J Pathol 1992; 140:427–47.
6.
Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors [review]. Subcell Biochem
1998; 31:205–62.
7.
Lauerová L, Kovařik J, Bártek J, Rejthar A, Vojtĕšek B. Novel monoclonal antibodies defining epitope of human
cytokeratin 18 molecule. Hybridoma 1988; 7:495–504.
8.
Sculean A, Berakdar M, Pahl S, Windisch P, Brecx M, Reich E, et al. Patterns of cytokeratin expression in
monkey and human periodontium following regenerative and conventional periodontal surgery. J Periodont Res
2001; 36:260–8.
9.
Notohara K, Hamazaki S, Tsukayama C, Nakamoto S, Kawabata K, Mizobuchi K, et al. Solid-pseudopapillary
tumor of the pancreas: immunohistochemical localization of neuroendocrine markers and CD10. Am J Surg
Pathol 2000; 24:1361–71.
10. Miettinen M, Limon J, Niezabitowski A, Lasota J. Patterns of keratin polypeptides in 110 biphasic, monophasic,
and poorly differentiated synovial sarcomas. Virchows Arch 2000; 437:275–83.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117629-003)
Dako Denmark A/S
IR618/PL/MNI/2009.12.04 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17