Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Caldesmon
klon h-CD
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR054
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Caldesmon, klon h-CD, Ready-to-Use, (Link), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w
identyfikacji raków lub nowotworów pochodzących z komórek mięśni gładkich (1–2). Interpretacja kliniczna
dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich
prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Kaldesmon jest białkiem zaangażowanym w kurczenie mięśni gładkich i kurczenie innych struktur, regulowanym
rozwojowo (3,4).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub
następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu,
6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do użycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i roztwór NaN3 o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: h-CD Izotyp: IgG1, kappa
Immunogen
Surowy ekstrakt z macicy ludzkiej (1)
Swoistość
Zidentyfikowano dwa blisko spokrewnione warianty ludzkiego białka kaldesmon, które różnią się pod względem
ruchliwości w elektroforezie i rozmieszczeniu w komórkach. Ekspresję wariantu h-kaldesmon (120–150 kDa)
wykazują przede wszystkim mięśnie gładkie, a wariant l-kaldesmon (70–80 kDa) występuje w tkankach i
komórkach niemięśniowych. Żadnego z tych wariantów nie wykryto w mięśniach szkieletowych (3).
Monoklonalne przeciwciało anty-kaldesmon — h-CD — rozpoznaje tylko wariant o masie 150 kDa (h-kaldesmon)
w testach Western blot ekstraktu z warstwy środkowej ludzkiej aorty i nie daje odczynu z ekstraktami z
fibroblastów pochodzących z hodowanego ludzkiego napletka (1).
Środki ostrożności
1.
2.
3.
4.
5.
Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z
ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby
uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu.
Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania,
Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego
produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, należy wykonywać
dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować
z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu. Optymalne wyniki uzyskuje się w
wyniku wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x)
(Link) (nr kat. K8000/K8004).
(115423-001)
307123PL_001 s. 1/3
Odparafinowane skrawki: Zaleca się wstępną obróbkę utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie
skrawków tkankowych przy użyciu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera
Instrukcja użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX
Target Retrieval Solution, High pH (10x) (Link) (nr kat. K8000/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować
następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu:
97°C przez 20 (±1) minut; ochłodzić do 65°C. Przepłukać skrawki rozcieńczonym roztworem o temperaturze
pokojowej EnVision FLEX Wash Buffer (10x) (Link) (nr kat. K8000).
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe
należy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002). W
oprogramowaniu Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe
informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika
aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w używanym systemie Autostainer, należy
skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również
przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez
patologów z różnym nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą
techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić
się, że działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki
jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować komórki mięśni
gładkich, natomiast we wszystkich preparatach dodatnich komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji
taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX
Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Wykazano, że monoklonalne przeciwciało anty-kaldesmon lokalizuje wariant h-kaldesmon w
preparatach mrożakowych tkanek ludzkich obejmujących rozwijające się mięśnie gładkie narządów
wewnętrznych z tchawicy, przełyku, jelita czczego i macicy płodu w 10–20 tygodniu życia. Przeciwciało antykaldesmon nie dawało odczynu z komórkami mięśni gładkich aorty z płodów w wieku 10 i 20 tygodni (1).
U osób dorosłych ekspresję kaldesmonu stwierdzono w komórkach mięśni gładkich naczyń i narządów
wewnętrznych, ale nie stwierdzono w komórkach nabłonkowych, śródbłonkowych ani w fibroblastach tkanki
łącznej. Wykazano, że przeciwciało anty-kaldesmon barwi komórki błony środkowej i subpopulację komórek
mięśni gładkich z błony wewnętrznej znajdującej się pod śródbłonkiem aorty osób dorosłych (1). W badaniach
immunohistochemicznych (IHC) preparatów mrożakowych prawidłowych sutków ludzkich wykazano, że
monoklonalne przeciwciało anty-kaldesmon barwiło komórki mięśni gładkich naczyń krwionośnych i podzbiór
komórek mięśniowo-nabłonkowych w zatokach przewodów mlecznych. Z przeciwciałem nie reagują komórki
mioepitelialne, kanaliki i komórki nabłonka przewodowego prawidłowych sutków (5).
Tkanki nieprawidłowe: Badania IHC prowadzone na rakach sutka wykazały, że monoklonalne przeciwciało antykaldesmon barwi subpopulację komórek mioepitelialnych, ale nie barwi miofibroblastów ani komórek rakowych
(6). Przeciwciało służy także do identyfikowania raków pochodzących z komórek mięśni gładkich, takich jak
mięśniaki gładkokomórkowe, mięśniaki gładkokomórkowe naczyniowe, mięśniakomięsaki gładkokomórkowe,
osiem mięsaków prążkowanokomórkowych, złośliwych włókniaków histiocytarnych, raków typu desmoid
(włókniec) i kłębczaki (2).
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
(115423-001)
Frid MG, et al. Phenotypic changes of human smooth muscle cells during development: Late expression of
heavy caldesmon and calponin. Dev Biol 1992; 153:185
Watanabe K, et al. h-Caldesmon in leiomyosarcoma and tumors with smooth muscle cell-like differentiation:
its specific expression in the smooth muscle cell tumor, Hum Pathol 1999, 30:392-396
Sobue K and Sellers JR. Caldesmon, a novel regulatory protein in smooth muscle and nonmuscle
actomyosin systems. J Biol Chem 1991; 266(19):12115
Glukhova MA, et al. Developmental changes in expression of contractile and cytoskeletal proteins in human
aortic smooth muscle. J Biol Chem 1990; 265(22):13042
Lazard D, et al. Expression of smooth muscle-specific proteins in myoepithelium and stromal myofibroblasts
of normal and malignant human breast tissue. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90:999
Wang NP, et al. Monoclonal antibodies (MAbs) to novel myoepithelium-associated proteins can distinguish
between benign and malignant lesions of the breast. US Canad Acad Pathol Abstr 1996; 26A:135
307123PL_001 s. 2/3
Wydanie 09/07
(115423-001)
307123PL_001 s. 3/3