Badanie przeciwbakteryjnych właściwości wybranych rodzajów

Badanie przeciwbakteryjnych w³aœciwoœci
wybranych rodzajów miodów pszczelich
Sobczak Karolina, Wieczorkiewicz Andrzej, Konieczna Olga
Sekcja Mikrobiologiczna Studenckiego Ko³a Naukowego Biologów, Instytut Mikrobiologii, Biotechnologii i Immunologii, Uniwersytet £ódzki
WSTÊP
Substancje naturalne od wieków stosowano w medycynie ludowej jako œrodki lecznicze przeciwko ró¿nym schorzeniom,
równie¿ o pod³o¿u bakteryjnym. Tak¿e dziœ ekstrakty z roœlin wykorzystuje siê do produkcji leków, suplementów diety
czy kosmetyków. Jedn¹ z takich substancji jest produkowany z nektaru kwiatowego przez pszczo³y miód, który posiada
w³aœciwoœci uzdrawiaj¹ce, znane ju¿ od czasów staro¿ytnych. Ju¿ Grecy i Rzymianie u¿ywali miodu do leczenia ran. Wspó³czeœni
badacze zainteresowali siê w swoich badaniach antyseptycznymi w³aœciwoœciami miodu, jednak mechanizm jego dzia³ania nie
jest jeszcze do koñca poznany.
CEL BADAÑ
Celem niniejszego projektu jest zbadanie bakteriostatycznej i bakteriobójczej aktywnoœci powszechnie stosowanej substancji roœlinnej, któr¹ jest miód.
Ponadto badanie ma porównaæ w³aœciwoœci przeciwbakteryjne ró¿nych rodzajów miodów pszczelich.
MATERIA£Y I METODY
W badaniach wykorzystano 6 rodzajów miodów pszczelich: z kwiatu pomarañczy, leœny, sosnowy, gryczany, domowy, naturalny.
Badano wra¿liwoœæ 5 gatunków bakterii: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis
Do porównania w³aœciwoœci antybakteryjnych miodów stosowano test mikrorozcieñczeñ w bulionie, za pomoc¹ którego oceniamy MIC miodu (minimalne stê¿enie hamuj¹ce
wzrost bakterii) oraz MBC (pierwsze stê¿enie, przy którym nie obserwowano wzrostu bakterii) (Ryc. 1.).
WYNIKI
2.
1.
Prz es iaæ bakte rie
z pod³o¿ a
wyj œc iow ego na
pod³o¿e
Müe lle ra-H intona
(24 h / 37 0 C )
3.
Sporz ¹dzi æ rozt wory m i odów (v/v) w ja³ owej s oli
fizj ologic znej . W ykonaæ sz ereg roz cieñc zeñ : 64% - 0,5%
R ozc ieñc zyæ za wi es inê
bakt eryjn¹ w ja ³ow ej
s oli fi zjol ogicz nej do
5
gês toœ æ 5*10 C F U/ m l
64%
32% 16% 8% 4%
2%
64%
32%
16%
8%
4%
2%
1%
0, 5%
Uzyskane w badaniu wartosci M IC / MBC dla wybranych gatunków bakterii
1% 0,5%
Zm i es zaæ na p³ yt ce pol is tyrenow ej w rów nej objêt oœ ci (100µ l) z aw ies inê bakte ryjn¹ w pod³o¿ u
M üell era –H intona (gês toœ æ 5*10 5 C F U / m l ) i rozt worów m i odów roz cieñc zonych w oœ m i u
s tê¿ eniac h (v/v) – inkuba cja 24h / 37 0 C .
M1 M 2 M 3 M 4 M 5 M6 K A K B
Badania, które przeprowadziliœmy wykaza³y, ¿e prawie wszystkie u¿yte
w doœwiadczeniu miody posiadaj¹ w³aœciwoœci przeciwbakteryjne. Uzyskane wartoœci
MIC dla 5 z nich mieszcz¹ siê w granicach 32% - 64%. Najs³abiej aktywny w stosunku
do drobnoustrojów okaza³ siê miód z kwiatu pomarañczy, poniewa¿ nie dzia³a³ hamuj¹co
na wzrost ¿adnego badanego gatunku bakterii.
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus epidermidis
Enterococcus faecalis
Odczyt wartoœci MIC (pierwsze stê¿enie miodu, przy którym nie obserwuje sie wzrostu bakterii) i okreœlenie
MBC (bakteriobójcze stê¿enie miodu).
ponad 64%
64% / p.64%
64%/ 64%
64%/ 64%
64% / p. 64%
ponad 64%
32% / 32%
32% / 64%
32%/ 32%
16%/ 16%
64% / 64%
ponad 64%
ponad 64%
ponad 64%
ponad 64%
ponad 64%
ponad 64%
ponad 64%
64
M
B
C
32
32
64
64
32
16
64%
32%
16%
8%
4%
2%
1%
0,5%
64% / p. 64%
64% / 64%
zaw ie si na dane go gatunku ba kteri i + ja³ owa sól fiz jologi czna
(kontrola biot yc zna)
M1 M2 M3 M4 M5 M6 KA KB
NATURALNY Z KWIATÓW POMARAÑCZY
64% / p. 64%
ponad 64%
m iód z danego roz cie ñcze nia + ja ³ow a s ól fiz jol ogi cz na
(kontrola abiot yczna )
64
4.
LEŒNY
SOSNOWY
DOMOWY
GRYCZANY
ponad 64%
64% / 64%
64%/ 64%
ponad 64%
64% / 64%
ponad 64%
ponad 64%
ponad 64%
Pod³o¿e ze stê¿eniem MIC i dwa nastêpne rozcieñczenia
0
przenoszono do pod³o¿a TSB ( 24h / 37 C) a nastêpnie
odczytywano MBC.
leœny
domowy
S.aureus
gryczany
E.faecalis
naturalny
z kwiatów
pomarañczy
S.epidermidis
Ryc. 2. Wplyw badanych miodów na Gram-dodatnie ziarniaki
64 64
Ryc. 1. Okreœlanie wra¿liwoœci bakterii na badane miody metod¹ mikrorozcieñczeñ w bulionie
sosnowy
64
64
64
64 64
sosnowy
domowy
gryczany
naturalny
M
B
C
WNIOSKI
Uzyskane wyniki potwierdzaj¹, i¿ miód pszczeli posiada sk³adniki wykazuj¹ce
aktywnoœæ antybakteryjn¹ wobec badanych gatunków drobnoustrojów,
w szczególnoœci S. epidermidis. Ten fakt ma swoje szerokie zastosowanie miêdzy
innymi w apiterapii, dziedzinie medycyny zajmuj¹cej siê leczeniem i profilaktyk¹
schorzeñ za pomoc¹ produktów pszczelich.
leœny
E.coli
z kwiatów
pomarañczy
P.aeruginosa
Ryc. 3. Wplyw badanych miodów na wzrost Gram-ujemnych paleczek
Spoœród badanych Gramdodatnich ziarniaków
Staphylococcus epidermidis
okaza³ siê najbardziej
wra¿liwy na zastosowane
w badaniu miody (Ryc. 2.).
Najskuteczniejsze
w³aœciwoœci antyseptyczne
wykaza³ w stosunku
do niego miód gryczany –
mia³ dzia³anie bójcze ju¿
w stê¿eniu 16 mg/ml.
Enterococcus faecalis by³
najmniej wra¿liwy na
badane miody – MIC
przekracza³o 64%, tym
samym nie
zaobserwowaliœmy
zahamowania jego wzrostu
pod wp³ywem dzia³ania
miodów.
Badane Gram-ujemne
pa³eczki charakteryzowa³y
siê podobn¹ wra¿liwoœci¹
na badane miody (Ryc. 3.).