Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV Klon CIV 22 Nr

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Collagen IV
Klon CIV 22
Nr kat. M 0785
Wydanie z 20.01.03
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV, Klon CIV 22, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje kolagen typu IV i stanowi cenne narzędzie w identyfikacji błon
podstawnych. Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację powinien
przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Wstęp
Kolagen IV stanowi podstawowy składnik w szczególności lamina densa błon podstawnych i ultrastrukturalnie
jest bezpostaciowy. Błony podstawne są cienkimi zewnątrzkomórkowymi matrycami rozdzielającymi komórki
miąższowe, śródbłonka i nabłonka od leżącej pod nimi tkanki łącznej. W błonach podstawnych kłębuszkowych i
kanalikowych 40% białka to kolagen typu IV.
Wykrywanie wewnątrzkomórkowego kolagenu typu IV jest z reguły trudne w związku z jego małym stężeniem.
Jednak można wykryć wewnątrzkomórkowy kolagen typu IV w nowopowstałych naczyniach włosowatych w
miejscach zapalnych maziówki w reumatoidalnym zapaleniu stawów (1).
Pod względem struktury białko składa się z czterech domen. Jedna z nich, potrójna helikalna domena kolagenu
IV jest utworzona przez połączenie dwóch łańcuchów polipeptydowych typu 1 i jednego typu 2. Domena ta
posiada długość 340 nm i jest mocno usieciowana mostkami dwusiarczkowymi (1, 2).
Diagnostyczne zastosowanie immunobarwienia kolagenu typu IV szczególnie skupia się na udowodnieniu
obecności blaszki podstawnej w guzach inwazyjnych. W szczególności wykazanie obecności natywnej błony
podstawnej wykorzystuje się do rozróżnienia łagodnych proliferacji gruczołowych takich, jak choroba
mikrogruczołów i dysplazja włóknista sutka od wyraźnie odróżniających się postaci raka, jak rak z kanalików
piersi (3).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant z hodowli komórkowej
oczyszczony przez dializę z 50 mmol/L Tris/HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN 3.
Klon: CIV 22 (2). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie IgG: zob. informacja podana na etykiecie fiolki.
Immunogen
Oczyszczone fragmenty pepsynowe kolagenu typu IV z ludzkich nerek (2).
Swoistość
Swoistość przeciwciała stwierdzono w badaniu radioimmunologicznym (RIA) podczas którego przeciwciało
rozpoznaje obecność epitopu w ludzkim kolagenie typu IV w natywnej zgodności, natomiast nie rozpoznaje
zredukowanego i alkilowanego białka w stanie zdenaturalizowanym. Barwienie immunoblotów przez
przeciwciało było ujemne, co dodatkowo wskazuje, że przeciwciało rozpoznaje potwierdzający epitop na
kolagenie typu IV (2).
Podczas immunoblottingu lub RIA nie wykryto żadnych reakcji krzyżowych przeciwciała z wyizolowanym ludzkim
kolagenem typu I, II, III i V (2).
Jak wykazano w badaniu RIA, przeciwciało reaguje krzyżowo z białkowym odpowiednikiem kolagenu IV u
krowy (2).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór
barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy
Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, nr
kat. S 1700. Mniej optymalne wyniki uzyskuje się przy zastosowaniu 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0
(107859-002)
M 0785/PL/COS/20.01.03 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Jednak Dako Target Retrieval Solution, o wysokim pH, nr
kat. S 3308 i wstępne przygotowanie tkanek za pomocą proteinazy K okazały się nieskuteczne. Nie wolno
dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia
immunocytochemicznego.
Skrawki zamrożone i przygotowanie komórek: Przeciwciało można stosować do znakowania utrwalonych w
acetonie skrawków zamrożonych (5, 6).
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Collagen IV, nr kat. M 0785, można rozcieńczać w
zakresie 1:25-1:50 w przypadku stosowania na skrawkach parafinowych ludzkich nerek utrwalonych w
formalinie, stosując podwyższoną temperaturę podczas odzyskiwania epitopu w Dako Target Retrieval
Solution, nr kat. S 1700, przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem
przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki i metody przygotowania i
powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse
IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeśli
stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury
barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczyć w
rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać
jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamrożonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazy
endogennej. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Tkanki normalne: Przeciwciało wykazuje charakterystyczne znakowanie błon podstawnych w różnych badanych
tkankach i organach, w tym w nerkach, skórze, mięśniach prostych i gładkich, śledzionie, węzłach chłonnych,
płucach, łożysku i ścięgnach. W śledzionie i węzłach chłonnych obserwuje się spodziewane fragmentaryczne
znakowanie przerwanych błon podstawnych zatok podczas, gdy inne naczynia krwionośne wykazują liniowe, ciągłe
znakowanie. W nerkach przeciwciało znakuje błony podstawne naczyń włosowatych, fragmenty matrycy
mezangialnej i torebki Bowmana oraz błony podstawne kanalików. Jedynie błona podstawna nabłonka rogówki
wykazuje ujemne znakowanie przy użyciu przeciwciała. Wszystkie inne struktury, oprócz błony podstawnej
podczas znakowania przeciwciałem są niezmiennie ujemne (2).
Tkanki patologiczne: We wrodzonym pęcherzowym oddzielaniu się naskórka (EB) przeciwciało umożliwiło szybkie
rozróżnienie pomiędzy głównymi wariantami choroby, EB simplex i EB dystrophica (4). Wokół rozszerzonych
naczyń, tzw. port wine stains, przeciwciało znakowało dużo szersze pasma, niż wokół naczyń w normalnej skórze
(5) a w angioimmunoblastycznym uogólnionym powiększeniu węzłów chłonnych, przeciwciało wiarygodnie ujawniło
proliferację naczyniową i małe ilości wewnątrzkomórkowych włókienek kolagenowych (6).
Piśmiennictwo
1. Matsubara T, Trüeb B, Fehr K, Rüttner JR. The localization and secretion of type IV collagen in synovial
capillaries by immunohistochemistry using a monoclonal antibody against human type IV collagen. Expl
Cell Biol 1984;52:159-69.
2. Odermatt BF, Lang AB, Rüttner JR, Winterhalter KH, Trüeb B. Monoclonal antibodies to human type IV
collagen. Useful reagents to demonstrate the heterotrimeric nature of the molecule. Proc Natl Acad Sci
1984;81:7343-47.
3. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. 1st ed.
London: Oxford University Press; 1999. p. 125-6.
4. Bolte C, Gonzalez S. Rapid diagnosis of major variants of congenital epidermolysis bullosa using a
monoclonal antibody against collagen type IV. Am J Derm 1995;17:580-3.
5. Mitsuhashi Y, Odermatt BF, Schneider BV, Schnyder UW. Immunohistological evaluation of endothelial
markers and basement membrane components in port-wine stains. Dermatologica 1988;176:243-50.
6. Knecht H, Odermatt BF, Maurer R, Rüttner JR. Diagnostic and prognostic value of monoclonal antibodies
in immunophenotyping of angioimmunoblastic lymphadenopathy/lymphogranulomatosis X. Br J Haematol
1987;67:19-24.
Objaśnienia symboli
(107859-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 0785/PL/COS/20.01.03 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17