Romku, fragmenty napisane różowa czcionką wymagają

RF LATEX
Test aglutynacyjny do jakościowego i półilościowego
oznaczenia faktora reumatoidalnego w surowicy ludzkiej.
Ulotka informacyjna dla zestawów o nr kat.: 96.642
ZASADA
Odczynnik
lateksowy
RF
jest
zawiesiną
cząstek
polistyrenowego lateksu ze specjalnie spreparowanym ludzkim
IgG w celu uniknięcia niespecyficznej aglutynacji. Czułość
odczynnika RF jest tak dobrana, aby bez uprzedniego
rozcieńczania próbki wykryć faktor reumatoidalny od stężenia 8
lU/ml (zgodnie ze standardem wyznaczonym przez światową
organizację zdrowia WHO).
STRESZCZENIE
Faktory
reumatoidalne
są
heterogeniczną
grupą
autoprzeciwciał, które są skierowane przeciwko antygenowym
determinantom w regionie Fc molekuł IgG. Stanowią one ważny
element w diagnostyce reumatoidalnego artretyzmu, mogą
również być obecne przy innych zapaleniowo-reumatoidalnych
schorzeniach,
a
także
przy
różnych
chorobach
niereumatoidalnych. Faktory reumatoidalne są również
wykrywane u zdrowych klinicznie pacjentów powyżej 60 roku
życia. Pomimo tych ograniczeń, wykrycie RF stanowi kryterium
diagnostyczne klasyfikacji reumatoidalnego artretyzmu według
American College of Reumatology. Autoprzeciwciała te
występują we wszystkich klasach immunoglobulin, jednakże
standardowe metody ograniczają się do wykrycia faktorów
reumatoidalnych typu IgM.
Klasyczna procedura oznaczania faktorów reumatoidalnych
polega na aglutynacji erytrocytów owcy lub cząstek lateksu
uczulonych za pomocą IgG. Wadami tych półilościowych metod
są słaba precyzja i powtarzalność pomiędzy laboratoriami jak
również trudności ze standaryzacją. Dlatego też zostały
wynalezione nowe metody oznaczania tych autoprzeciwciał jak
nefelometria, turbidymetria, metody immunoenzymatyczne oraz
radioimmunologiczne.
Niniejszy test RF bazuje na zasadzie immunologicznej
aglutynacji wzmocnionej przez cząsteczki lateksu.
ODCZYNNIKI
R1
Cząsteczki lateksu opłaszczone przeciwciałami RF
Konserwant
R2 kontrola dodatnia
R-r białka zawierający czynniki reumatoidalne powyżej 8 lU/ml
Konserwant
R3 kontrola ujemna
R-r białka zawierający czynniki reumatoidalne poniżej 8 lU/ml
Konserwant
PRZECHOWYWANIE I STABILNOŚĆ
Odczynniki i surowice kontrolne są stabilne aż do daty ważności.
Zestaw testowy powinien być przechowywany w chłodni (2-8°C).
NIE ZAMRAZAĆ ! Nie używać po upływie terminu ważności.
MATERIAŁ BADANY
Pobierać materiał używając standardowych probówek.
Do badania używać czystych i świeżych próbek surowicy. Użycie
osocza, surowicy lipemicznej lub kontaminacja drobnoustrojami
może spowodować fałszywe wyniki. Jeżeli test nie może zostać
wykonany niezwłocznie po pobraniu próbki, przechowywać materiał
badany w temperaturze 2-8°C do 72 h. W razie potrzeby dłuższego
przechowywania, materiał zamrozić (-20°C). Materiał zawierający
osad odwirować przed przeprowadzeniem testu.
OGRANICZENIA
•
Stosować wyłącznie do profesjonalnej diagnostyki in vitro. Nie
używać po upływie terminu ważności.
•
Nie jeść, nie pić i nie palić w strefie gdzie operuje się
materiałem badanym lub testami.
•
Traktować wszystkie próbki jako materiał zakaźny.
Przestrzegać ustalonych środków ostrożności przeciwko
zagrożeniu mikrobiologicznemu przez cały czas wykonywania
testu. Postępować zgodnie ze standardowymi procedurami
właściwego usuwania materiału zakaźnego.
•
Zanieczyszczenie surowicy oraz dłuższy czas reakcji testu niż
3 min może powodować fałszywie pozytywne wyniki.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Odczynniki zawierające azydek sodu mogą reagować z miedzią i
ołowiem tworząc silnie wybuchowe azydki metali. Zużyte
odczynniki rozcieńczać przez spłukiwanie ich dużą ilością wody w
celu uniknięcia tworzenia się azydków w kanalizacji. Zarówno
dodatnia jak i ujemna kontrola została przygotowana z ludzkiej
surowicy, przebadanej w kierunku HBsAg i HIV przy użyciu metod
licencjonowanych przez FDA. W wyniku tych badań nie
stwierdzono infekcji. Niemniej, żadna z metod nie może całkowicie
wykluczyć obecności infekcji. Dlatego też każdy materiał
biologiczny powinien być traktowany jako potencjalnie zakaźny.
MATERIAŁY
Materiały dostarczone
•
Odczynnik lateksowy
•
Kontrola ujemna i dodatnia
•
Płytka szklana lub zestaw jednorazowych płytek z sześcioma
polami reakcyjnymi
•
Mieszadełka
•
Ulotka
Materiały potrzebne, lecz nie dostarczone
•
Pojemnik na materiał
•
Minutnik
•
Pipeta
WYKONANIE TESTU
Przed przystąpieniem do testu doprowadzić odczynniki, i
materiał badany do temperatury pokojowej (15-30°C).
Oznaczenie jakościowe
1. Umieścić po 1 kropli (40µl) każdej z surowic badanych na
kolejne pola testowe na płytce reakcyjnej
2. Na oznaczone pola testowe nanieść surowice kontrolne:
dodatnią i ujemną.
3. Delikatnie wymieszać zawiesinę RF Latex. Nie wstrząsać,
unikać powstania piany. Napełnić zakraplacz i dodać po 1
kropli zawiesiny do każdej z surowic na płytce reakcyjnej.
4. Używając załączonych mieszalników wymieszać zawiesinę z
surowicą na każdym z pól i rozprowadzić płyn na całą
powierzchnię pola testowego.
5. Mieszać płyn na płytce testowej 2 min. ręcznie (przez
powolne przechylanie płytki) lub przy użyciu wytrząsarki
rotacyjnej przy prędkości 80-100 obr/min.
6. Po 2 min. mieszania bezzwłocznie ocenić wzrokowo
powierzchnię każdego pola w bezpośrednim świetle.
Oznaczenie ilościowe
1. Używając roztwór soli fizjologicznej przygotować kolejne
rozcieńczenia surowicy badanej 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 lub wg
własnego modelu. Nie rozcieńczać surowic kontrolnych!
2. Delikatnie wymieszać zawiesinę RF Latex. Nie wstrząsać,
unikać powstania piany. Napełnić zakraplacz i dodać po 1
kropli zawiesiny do każdej z surowic na płytce reakcyjnej.
3. Kolejne rozcieńczenia badać wg metody opisanej w p.
Oznaczenie jakościowe.
INTERPRETACJA WYNIKÓW
(proszę odnieść treść do ilustracji poniżej)
Wyniki testu jakościowego
Ujemny rys.2)
Reakcję ujemną wskazuje jednolita, mleczna zawiesina bez
aglutynacji, tak jak obserwuje się to w kontroli ujemnej.
Dodatni (rys.1)
Na reakcję dodatnią wskazuje jakakolwiek widzialna
aglutynacja w mieszaninie reakcyjnej. Reakcja w próbce
badanej powinna zostać porównana z kontrolą dodatnią.
Wyniki testu ilościowego
Największe rozcieńczenie dające jeszcze aglutynację
wskazuje miano RF w surowicy badanej jak pokazuje poniższa
tabela
Rozcieńczenie
RF w surowicy
surowicy
nierozcieńczonej (lU/ml)
1:2
16
1:4
32
1:8
64
1:16
128
Interpretacja
WARTOŚCI OCZEKIWANE
Dorośli: <8 lU/ml
Faktory reumatoidalne są immunoglobulinami (większość IgM) z
czynnymi przeciwciałami. Faktory te są obecne u większości
pacjentów cierpiących na artretyzm reumatyczny. Istnieje wiele
faktorów
reumatoidalnych,
nie
ma
natomiast
testu
umożliwiającego wykrycie ich wszystkich, z uwagi na fakt iż
niektóre z nich działają przeciwko ludzkiej IgG, inne przeciwko
zwierzęcym IgG, a inne działają zarówno przeciw ludzkim jak i
zwierzęcym IgG. Zaleca się stosowanie specyficznego testu
WR to wykrywania reumatoidalnych faktorów przeciw
zwierzęcym IgG.
Uwaga:
Zaleca się ustalenie i stosowanie własnych wartości
referencyjnych przez każde laboratorium. Podane dane są
jedynie wskazówką.
Jak w przypadku innych testów, wszystkie wyniki muszą być
rozpatrywany w kontekście badań klinicznych, historii choroby
pacjenta, i innych danych dostępnych lekarzowi.
BIBLIOGRAFIA
1. Adams, L.E., Hess, E. J. Amer. Technol. 48 (1978)
2. Dito, W. Am.Soc.Clin. Pat. 69 (1976)
3. Normausell, D. Immunochemistry 9, (1972)
4. Plotz and Singer, Am.J.Med. 22, (1979)
Symbole
= Zapoznaj się z treścią ulotki;
= In vitro Diagnosticum;
= Ważny do;
= numer serii;
= Przechowywać w temp.
= numer artykułu
= ten produkt jest zgodny z dyrektywą 98/79EG z dnia 27.10.1998;
STAMAR
:
41-300 Dąbrowa Górnicza ul.Perla 5
tel : 32 2617720; fax : 32 2617760 ;
e-mail : [email protected]
Ul 96.642-RF_Latex-v0407