Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin Klon

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Smooth Muscle Actin
Klon 1A4
Nr kat. M0851
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin, klon 1A4, jest przeznaczone do badań
immunohistochemicznych. Przciwciało znakuje komórki mięśni gładkich, miofibroblasty i komórki mięśniowonabłonkowe stanowiąc cenne narzędzie w identyfikacji mięśniaków gładkich, mięsaków gładkokomórkowych
(1, 2) i gruczolaków pleomorficznych (3). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być
uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Cytoplazmatyczne aktyny należące do układu mikrofilamentów białek cytoszkieletu są jednymi z najlepiej
zachowanych białek eukariotycznych, których ekspresja występuje u ssaków i ptaków. Białko aktyny składa się z
sześciu i izoform, o zróżnicowanej sekwencji aminokwasów, lecz posiadających taki sam ciężar cząsteczkowy
42 kDa. Izoformy wykazują ponad 90% ogólną homologię sekwencji lecz tylko 50-60% homologię w swoich 18 Nterminalnych resztach. Region N-terminalowy wydaje się być głównym regionem antygenowym (4). Istnieją różne
izoformy  swoiste dla tkanek mięśniowych, tj. odpowiednio izoforma  mięśnia szkieletowego, izoforma  mięśnia
sercowego oraz izoforma  mięśnia gładkiego (1). Aktyny - i  mogą występować w komórkach mięśni oraz w
większości innych typów komórek w organizmie, w tym w komórkach niemięśniowych (5).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L Tris/HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: 1A4. Klon 1A4 jest identyczny z anti-asm-1 opisanym w pozycji (4). Izotyp: IgG2a, kappa.
Stężenie mysiej IgG: zob. informacja podana na etykiecie fiolki.
Stężenie białek w różnych partiach może się różnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy użyciu różnych partii
produktu, miano każdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
N-terminalny syntetyczny dekapeptyd aktyny  mięśni gładkich sprzężony z K.L.H. (keyhole limpet
haemocyanin) (4).
Swoistość
Podczas stosowania techniki Western blot i immunoblottingu SDS-PAGE izoformy aktyny mięśni gładkich ,
przeciwciało znakuje pasmo odpowiadające aktynie  mięśni gładkich (4).
Jak wykazano podczas stosowania techniki Western blot i(lub) badania immunohistochemicznego przeciwciało
reaguje krzyżowo z białkiem będącym odpowiednikiem aktyny  mięśni gładkich u kurcząt, krów i szczurów (4).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór
barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy
Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Zaleca się wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu bufora Tris 10 mmol/L, EDTA
1 mmol/L o pH 9,0. Gorsze wyniki daje stosowanie Dako Target Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat.
S3308, lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0. Natomiast roztwór Dako Target Retrieval Solution, nr
kat. S1700 okazał się nieskuteczny. Wstępne przygotowanie tkanek proteinazą K okazało się niszczące dla
(108106-004)
M0851/PL/KRM/2008.09.30 s. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
epitopu. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas przygotowania lub następującej po nim
procedury barwienia immunohistochemicznego.
Skrawki zamrożone i przygotowanie komórek: Przeciwciało można stosować do znakowania utrwalonych w
acetonie skrawków zamrożonych (1).
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actinnr kat. M0851, można
używać w rozcieńczeniu w stosunku 1:50-1:100 podczas stosowania na skrawkach normalnych ludzkich tkanek
okrężnicy utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, stosując podwyższoną temperaturę dla
odzyskiwania epitopu w buforze Tris 10 mmol/L, EDTA 1 mmol/L o pH 9,0 przez 20 minut oraz inkubację w
temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w
zależności od próbki i metody przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych
laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG2a, nr kat. X0943, rozcieńczona do takiego
samego stężenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli
ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te
odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat.
S0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu Dako LSAB™+/HRP, nr kat. K0679 oraz zestawów Dako
EnVision™+/HRP, nr kat. K4004 oraz K4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamrożonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazy
endogennej. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunohistochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia.
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich w naczyniach krwionośnych, ponadto przewody
ślinowe, komórki mięśniowo-nabłonkowe wokół gronek w gruczołach ślinowych (3). Komórki mięśni gładkich w
35/36 przypadkach normalnej mięśniówki macicy były również dodatnio znakowane (2). Ponadto obserwowano
przejściowe znakowanie komórek perisinusoidalnych wątroby (6). W zamrożonych tkankach przeciwciało znakuje
miofibroblasty i komórki mięśniowo-nabłonkowe wokół gronek i kanalików gruczołów sutkowych, podczas, gdy
nabłonki (gruczołów, płaskie), limfocyty, komórki mięśni sercowych i szkieletowych, komórki śródbłonka, komórki
tłuszczowe, komórki Schwanna i fibroblasty są ujemne (1).
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 24/26 mięśniaków gładkich, 6/7 atypowych mięśniaków gładkich i
21/25 mięsaków gładkokomórkowych macicy, jak również 13/13 pozamacicznych wrzecionowatych mięsaków
gładkokomórkowych nie-żołądkowojelitowych (2). Ponadto przeciwciało znakowało zmienne ilości komórek w 8/8
pseudo mięsakowych guzach miofibroblastycznych pęcherza moczowego u dzieci (7). W 19/20 przypadków
gruczolaków pleomorficznych przeciwciało znakowało komórki nabłonkowe guza (komórki mięśniowo-nabłonkowe)
(3). W tkankach zamrożonych przeciwciało oprócz znakowania 5/5 mięśniaków gładkich i 6/7 mięsaków
gładkokomórkowych znakowało również 4/22 przypadków złośliwej włóknistej histocytomy i 1/2 mięsaka
prążkowanokomórkowego. 6/6 złośliwych nerwiakmięsaków było ujemnych jak również 13/13 innych guzów tkanki
miękkiej, w tym 1 włókniakomięsak, 6 tłuszczakomięsaków, 1 mięsak z naczyń krwionośnych, 1 naczyniak
krwionośny naczyń włosowatych, guz z nerwów obwodowych z różnicowaniem mięśni prążkowanych (Triton
tumour) i 3 maziówczaki złośliwe (1).
Piśmiennictwo
1. Roholl PJM, Elbers HRJ, Prinsen I, Claessens JAJ, van Unnik JAM. Distribution of actin isoforms in
sarcomas: an immunohistochemical study. Hum Pathol 1990;21:1269-74.
2. Rizeq MN, van de Rijn M, Hendrickson MR, Rouse RV. A comparative immunohistochemical study of
uterine smooth muscle neoplasms with emphasis on the epithelioid variant. Hum Pathol 1994;25:671-7.
3. Brennan PA, Umar T, Zaki GA, Langdon JD, Spedding A, Buckley J, et al. Are myoepithelial cells
responsible for the widespread expression of inducible nitric oxide synthase in pleomorphic adenoma? An
immunohistochemical study. J Oral Pathol Med 2000;29:279-83.
4. Skalli O, Ropraz P, Trzeciak A, Benzonana G, Gillessen D, Gabbian G. A monoclonal antibody against smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation. J Cell Biol 1986;103:2787-96.
5. Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD. The cytoskeleton. In: Alberts B, Bray D, Lewis J,
Raff M, Roberts K, Watson JD, editors. Molecular biology of the cell. 2nd ed. New York and London:
Garland Publishing; 1989. p. 613-629.
6. Schmitt-Gräff A, Krüger S, Bochard F, Gabbiani G, Denk H. Modulation of alpha smooth muscle actin and
desmin expression in perisinusoidal cells of normal and diseased livers. Am J Pathol 1991;138:1233-42.
7. Hojo H, Newton WA, Hamoudi AB, Qualman SJ, Wakasa H, Suzuki S, et al. Pseudosarcomatous
myofibroblastic tumor of the urinary bladder in children: a study of 11 cases with review of the literature. Am
J Surg Pathol 1995;19:1224-36.
Objaśnienia symboli
(108106-004)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M0851/PL/KRM/2008.09.30 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17