cobas Cdiff Test
Transkrypt
cobas Cdiff Test
cobas® Cdiff Test do u ytku z systemem cobas® 4800 Do stosowania w diagnostyce in vitro cobas® 4800 System Sample Preparation Kit 240 Tests 960 Tests P/N: 05235782190 P/N: 05235804190 cobas® 4800 System Lysis Kit 1 240 Tests 960 Tests P/N: 06768253190 P/N: 06768270190 cobas® 4800 System Wash Buffer Kit 240 Tests 960 Tests P/N: 05235863190 P/N: 05235871190 cobas® 4800 System Internal Control Kit 1 20 Runs P/N: 06768318190 cobas® 4800 Cdiff Amplification/Detection Kit 80 Tests 240 Tests P/N: 06768237190 P/N: 06768261190 cobas® 4800 Cdiff Controls and Cofactor Kit 10 Runs P/N: 06768300190 cobas® Cdiff Test SPIS TRE CI Zastosowanie Podsumowanie i obja nienie testu/zasady procedury Informacje podstawowe: badanie przesiewowe pod k tem bakterii C. difficile ................................... 4 Obja nienie testu ................................................................................................................................. 5 Zasady procedury ................................................................................................................................ 5 Przygotowanie próbek ................................................................................................................ 5 ® Amplifikacja w reakcji PCR i detekcja metod TaqMan ............................................................ 6 Amplifikacja wybiórcza ................................................................................................................ 6 Materia y, odczynniki i próbki Dostarczane materia y i odczynniki...................................................................................................... 7 Przechowywanie i u ytkowanie odczynników .................................................................................... 13 Wymagane materia y dodatkowe ....................................................................................................... 14 Materia y opcjonalne .......................................................................................................................... 14 Urz dzenia i oprogramowanie wymagane, lecz niedostarczane ....................................................... 15 Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania Ostrze enia i rodki ostro no ci ........................................................................................................ 15 Dobra praktyka laboratoryjna ............................................................................................................. 16 Zanieczyszczenie ............................................................................................................................... 16 Integralno ........................................................................................................................................ 16 Utylizacja ............................................................................................................................................ 17 Rozlanie p ynów i czyszczenie ........................................................................................................... 17 Pobieranie, transport i przechowywanie próbek ................................................................................ 17 Pobieranie próbek ..................................................................................................................... 17 Przechowywanie i trwa próbek podczas transportu ........................................................... 17 Procedura testowa Wykonywanie oznaczenia .................................................................................................................. 18 Przebieg pracy .......................................................................................................................... 18 Instrukcja u ytkowania .............................................................................................................. 18 Wyniki Kontrola jako ci i wa no wyników .................................................................................................. 23 Kontrola dodatnia ...................................................................................................................... 23 Kontrola ujemna ........................................................................................................................ 23 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 2 cobas® Cdiff Test Kontrola wewn trzna ................................................................................................................ 23 Interpretacja wyników......................................................................................................................... 23 Ograniczenia metody ......................................................................................................................... 24 Ocena skuteczno ci w badaniach nieklinicznych Czu analityczna ........................................................................................................................... 26 Detekcja genotypów bakterii C. difficile ............................................................................................. 26 Precyzja .................................................................................................................................... 28 Swoisto analityczna ............................................................................................................... 29 Substancje wp ywaj ce na wynik testu ..................................................................................... 31 Korelacja ................................................................................................................................... 33 Dodatkowe informacje ....................................................................................................................... 35 Najwa niejsze cechy oznaczenia ............................................................................................. 35 Oznaczenia ............................................................................................................................... 36 Producent i dystrybutorzy ......................................................................................................... 37 Znaki towarowe i patenty .......................................................................................................... 37 Copyright ................................................................................................................................... 37 Pi miennictwo ........................................................................................................................... 38 Wersja dokumentu .................................................................................................................... 40 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 3 cobas® Cdiff Test Zastosowanie Test cobas® Cdiff do stosowania z systemem cobas® 4800 to zautomatyzowany, jako ciowy test diagnostyczny in vitro, wykorzystuj cy cuchow reakcj polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym do bezpo redniego wykrywania genu toksyny B (tcdB) szczepów toksynogennych Clostridium difficile (C. difficile) w próbkach (p ynnych lub mi kkich) nieuformowanego stolca pozyskanych od pacjentów, u których podejrzewa si zaka enie bakteriami C. difficile (CDI). Test cobas® Cdiff jest przeznaczony do stosowania jako wsparcie podczas diagnozowania zaka CDI u ludzi z uwzgl dnieniem klinicznych i epidemiologicznych czynników ryzyka. Podsumowanie i obja nienie testu/zasady procedury Informacje podstawowe: badanie przesiewowe pod k tem bakterii C. difficile C. difficile to Gram-dodatnie, beztlenowe, przetrwalnikuj ce laseczki, zidentyfikowane w pó nych latach 70. jako czynnik etiologiczny rzekomob oniastego zapalenia jelit zwi zanego z antybiotykoterapi 1,2. Uwa a si , e odpowiadaj one za 15–20% przypadków biegunki wywo anej antybiotykoterapi oraz za praktycznie wszystkie przypadki rzekomob oniastego zapalenia jelit zwi zanego z przyjmowaniem antybiotyków3. W ci gu ostatniej dekady obserwowano sta y wzrost cz sto ci przypadków zaka wywo ywanych przez bakterie C. difficile (CDI), które obecnie stanowi istotny problem kliniczny w krajach rozwini tych. Podczas gdy wska niki zachorowalno ci wynosi y 30–40 przypadków w 100 000 populacji szpitali specjalizuj cych si w leczeniu ostrych przypadków na terenie Stanów Zjednoczonych, cz sto wyst powania wzros a do ponad 80 przypadków na 100 000 osób w 2005 r.4. Opisywano ju wyst powanie epidemii zaka CDI5. Bezpo redni koszt zwi zany z zaka eniami CDI wyniós 6326 USD na przypadek zachorowania na terenie Stanów Zjednoczonych6. Za rosn cz sto wyst powania odpowiada cz ciowo pojawienie si rzekomo hiperwirulentnego szczepu klasyfikowanego jako rybotyp 027/Ameryka Pó nocna, pulsotyp 1 (NAP1) i toksynotyp III. Toksynogenne szczepy C. difficile zwykle wytwarzaj dwa rodzaje toksyn: toksyn A (enterotoksyn ) i toksyn B (cytotoksyn )7. Niewielki odsetek szczepów wytwarza wy cznie toksyn B8. W ostatnich czasach opisywano rosn wirulencj szczepów wytwarzaj cych inn toksyn , okre lan mianem toksyny binarnej, i obci onych delecj w genie negatywnego regulatora tcdC9,10. Zg aszano, e te ostatnie szczepy cechuje wi ksza wirulencja in vitro i wy sza zachorowalno oraz umieralno u ludzi11,12. Po kolonizacji toksynogennym szczepem C. difficile pacjenci mog pozostawa bezobjawowymi nosicielami lub zachorowa na chorob jelit. Cechy kliniczne zaka enia CDI mog przyjmowa posta od agodnej biegunki do zagra aj cego yciu rzekomob oniastego zapalenia jelit, któremu towarzyszy ból brzucha, silna biegunka i objawy ogólnoustrojowe, takie jak gor czka, jad owstr t, nudno ci i z e samopoczucie. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 4 cobas® Cdiff Test Rozpoznanie zaka enia CDI zwykle opiera si na wykazaniu obecno ci toksyny A i/lub B w próbkach stolca. Wykazanie wyst powania efektu cytopatycznego w monowarstwie komórek wynikaj cego z dzia ania toksyny B jest uznawane przez wiele osób za „z oty standard”13, 14. Wykazanie efektu cytopatycznego mo na osi gn przez bezpo redni inkubacj supernatantu stolca z monowarstw komórek. Mo na równie prowadzi hodowl izolatów C. difficile w bulionie selektywnym, a uzyskany supernatant wykorzysta do inkubacji z monowarstw komórek (hodowla toksynogenna)15. W przypadku obu technik ko cowy wynik uzyskuje si po co najmniej 48–72 godzinach. Oznaczenia immunologiczne s powszechnie stosowane do detekcji toksyny A oraz B, poniewa umo liwiaj uzyskanie dodatniego wyniku w czasie krótszym ni 4 godziny. Jednak ich czu jest znacz co ni sza w porównaniu z hodowl tkankow 16. W porównaniu z klinicznymi kryteriami potwierdzaj cymi wyst pienie zaka enia CDI reakcj PCR cechuje czu , swoisto oraz warto ci predykcyjne wyników dodatnich i ujemnych wynosz ce odpowiednio 93,3%, 97,4%, 75,5% oraz 99,4% z czasem oczekiwania <4 godzin15. Reakcja PCR jest uznawana za optymalny, szybki, pojedynczy test do wykrywania toksyny produkowanej przez bakterie C. difficile17-20. Mimo dramatycznego wzrostu cz sto ci zachorowa i nasilenia zaka CDI metronidazol lub wankomycyna pozostaj leczeniem farmakologicznym z wyboru w przypadku epizodów ostrych i zaka nawracaj cych21. Do metod kontroli zaka nale y rozwa ne stosowanie antybiotykoterapii, zapobieganie zaka eniom krzy owym oraz aktywny nadzór nad przypadkami zachorowa 22. Nie zaleca si powtarzania testu w celu potwierdzenia wyleczenia, poniewa toksyny mog by obecne w organizmie przez d szy czas bez dawania objawów klinicznych. Z tego powodu istnieje wielka potrzeba wysoce czu ej i szybkiej, zautomatyzowanej metody detekcji bakterii C. difficile. Metody molekularne oferuj potencja istotnego skrócenia czasu wykrywania, umo liwiaj c przez to szybkie rozpocz cie leczenia przeciwbakteryjnego oraz wczesne wdro enie 17-20 metod kontroli zaka . Obja nienie testu Test cobas® Cdiff obejmuje dwa g ówne procesy: (1) zautomatyzowane przygotowanie próbek w celu izolacji kwasów nukleinowych z próbek nieuformowanego stolca; (2) amplifikacj docelowych sekwencji DNA w reakcji PCR z wykorzystaniem swoistych dla szczepów C. difficile primerów, a tak e detekcj w czasie rzeczywistym wyznakowanych fluorescencyjnie, rozszczepionych detekcyjnych sond oligonukleotydowych swoistych dla bakterii C. difficile. Przed rozpocz ciem zautomatyzowanego procesu przygotowania do wszystkich próbek dodawana jest kontrola wewn trzna, zawieraj ca niepowi zan , losow sekwencj DNA, poddawana amplifikacji i detekcji jednocze nie z ka próbk w celu umo liwienia kontroli ca ego procesu. Zasady procedury Przygotowanie próbek Przygotowanie próbek do testu cobas® Cdiff jest zautomatyzowane za pomoc aparatu cobas x 480. Mikroorganizmy s poddawane lizie z u yciem czynnika chaotropowego, proteinazy K oraz odczynnika SDS. Uwolnione kwasy nukleinowe, wraz z dodanym DNA stanowi cym kontrol wewn trzn , s wi zane z cz steczkami magnetycznymi. S one przep ukiwane, a nast pnie poddawane elucji w ma ej obj to ci buforu. Nast pnie aparat pobiera porcj materia u poddanego elucji i przygotowuje reakcj PCR z u yciem aktywowanego odczynnika Master Mix. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 5 cobas® Cdiff Test Amplifikacja w reakcji PCR i detekcja metod TaqMan® Etapy cykli reakcji PCR oraz detekcja docelowego sygna u zachodz w analizatorze cobas z 480. Odczynnik Master Mix zawiera pary primerów i sondy swoiste dla dwóch elementów docelowych: toksyny B oraz kontroli wewn trznej. Je li docelowe sekwencje kwasu nukleinowego s obecne, dojdzie do amplifikacji z u yciem odpowiednich primerów oraz termostabilnej polimerazy DNA, co dzie skutkowa o utworzeniem produktów reakcji PCR (amplikonu). Te produkty s wykrywane przez swoiste sondy TaqMan zawieraj ce barwnik fluorescencyjny oraz wygaszacz. W stanie wyj ciowym wygaszacz t umi fluorescencj barwnika. Jednak w przypadku obecno ci produktu PCR sonda z nim hybrydyzuje i ulega rozszczepieniu na skutek dzia ania polimerazy, która wykazuje aktywno nukleazy w kierunku od ko ca 5' do ko ca 3'. Ta reakcja umo liwia emisj fluorescencji z barwnika, a sygna jest rejestrowany w czasie rzeczywistym w trakcie ka dego cyklu reakcji PCR przez analizator cobas z 480. Sygna jest interpretowany przez oprogramowanie systemu cobas® 4800 i przedstawiany w postaci ko cowych wyników. Amplifikacja wybiórcza Amplifikacj wybiórcz badanego kwasu nukleinowego z próbki klinicznej przy u yciu testu cobas® Cdiff uzyskuje si dzi ki zastosowaniu enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylazy) i trójfosforanu dezoksyurydyny (dUTP). Enzym AmpErase rozpoznaje i katalizuje niszczenie nici DNA zawieraj cych dezoksyurydyn 23, lecz nie DNA zawieraj cego dezoksytymidyn . Dezoksyurydyny nie stwierdza si w wyst puj cym naturalnie DNA, natomiast jest ona zawsze obecna w amplikonie z uwagi na stosowanie trójfosforanu dezoksyurydyny zamiast trójfosforanu tymidyny jako jednego spo ród dNTPs w odczynniku Master Mix; dlatego te jedynie amplikon zawiera dezoksyurydyn . Dezoksyurydyna powoduje wra liwo zanieczyszczaj cego amplikonu na rozk ad przez enzym AmpErase przed amplifikacj docelowego DNA. Zawarty w odczynniku Master Mix enzym AmpErase katalizuje rozszczepienie DNA zawieraj cego dezoksyurydyn w miejscu reszt dezoksyurydynowych przez otwarcie pier cienia dezoksyrybozy w pozycji C1. Podczas ogrzewania w pierwszym cyklu termicznym w pH zasadowym odczynnika Master Mix cuch amplikonu DNA p ka w pozycji dezoksyurydyny, w ten sposób wykluczaj c dalsz amplifikacj DNA. Enzym AmpErase jest nieczynny w temperaturach powy ej 55°C, tj. w czasie trwania ca ego cyklu termicznego, dlatego te nie niszczy on amplikonu docelowego. Wykazano, e test cobas® Cdiff dezaktywuje na ka reakcj PCR co najmniej 1000 kopii zawieraj cego dezoksyurydyn amplikonu C. difficile. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 6 cobas® Cdiff Test Materia y, odczynniki i próbki Dostarczane materia y i odczynniki Zestaw/kasety Elementy i sk adniki odczynników Ilo na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie MGP ® cobas 4800 System Sample Preparation Kit (Zestaw do przygotowywania próbek w systemie ® cobas 4800) (Szklane cz stki o w ciwo ciach ® magnetycznych systemu cobas 4800) Szklane cz stki o w magnetycznych ciwo ciach 10 x 4,5 ml 93% izopropanolu 240 testów (P/N: 05235782190) Niebezpiecze stwo H225 Wysoce atwopalna ciecz i pary. H319 Dzia a dra ni co na oczy. H336 Mo e wywo ywa uczucie senno ci lub zawroty g owy. P210 Przechowywa z dala od róde ciep a, gor cych powierzchni, róde iskrzenia, otwartego ognia i innych róde zap onu. Nie pali . P233 Przechowywa pojemnik szczelnie zamkni ty. P261 Unika wdychania py u/dymu/gazu/ mg y/par/rozpylonej cieczy. P280 Stosowa r kawice ochronne/ ochron oczu/ochron twarzy. P303 + P361 + P353 W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓR (lub z w osami): Natychmiast zdj ca zanieczyszczon odzie . Sp uka skór pod strumieniem wody/prysznicem. P370 + P378 W przypadku po aru: U suchego piasku, proszku chemicznego lub rodka pianotwórczego odpornego na dzia anie alkoholi do gaszenia. Nie dotyczy EB ® (Bufor do elucji systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 10 x 18 ml 0,09% azydku sodu 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 7 cobas® Cdiff Test Zestaw/kasety Elementy i sk adniki odczynników Ilo na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie MGP ® cobas 4800 System Sample Preparation Kit (Zestaw do przygotowywania próbek w systemie ® cobas 4800) (Szklane cz stki o w ciwo ciach ® magnetycznych systemu cobas 4800) Szklane cz stki o w magnetycznych ciwo ciach 10 x 13,5 ml 93% izopropanolu 960 testów (P/N: 05235804190) Niebezpiecze stwo H225 Wysoce atwopalna ciecz i pary. H319 Dzia a dra ni co na oczy. H336 Mo e wywo ywa uczucie senno ci lub zawroty g owy. P210 Przechowywa z dala od róde ciep a, gor cych powierzchni, róde iskrzenia, otwartego ognia i innych róde zap onu. Nie pali . P233 Przechowywa pojemnik szczelnie zamkni ty. P261 Unika wdychania py u/dymu/gazu/ mg y/par/rozpylonej cieczy. P280 Stosowa r kawice ochronne/ ochron oczu/ochron twarzy. P303 + P361 + P353 W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓR (lub z w osami): Natychmiast zdj ca zanieczyszczon odzie . Sp uka skór pod strumieniem wody/prysznicem. P370 + P378 W przypadku po aru: U suchego piasku, proszku chemicznego lub rodka pianotwórczego odpornego na dzia anie alkoholi do gaszenia. Nie dotyczy EB ® (Bufor do elucji systemu cobas 4800) Bufor Tris-HCl 10 x 18 ml 0,09% azydku sodu 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 8 cobas® Cdiff Test Zestaw/kasety Elementy i sk adniki odczynników Ilo na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie LYS-1 (Bufor do lizy 1 w systemie ® cobas 4800) Cytrynian sodu 5% polidokanol 42,6% tiocyjanianu guanidyny Ditiotreitol Niebezpiecze stwo H302 + H332 Dzia a szkodliwie po 10 x 24 testy po kni ciu i w nast pstwie wdychania. H317 Mo e powodowa reakcj alergiczn skóry. H318 Powoduje powa ne uszkodzenie oczu. H334 Mo e powodowa objawy alergii lub astmy lub trudno ci w oddychaniu w nast pstwie wdychania. H412 Dzia a szkodliwie na organizmy wodne, powoduj c d ugotrwa e skutki. PK EUH032 W kontakcie z kwasami uwalnia ® (Proteinaza K systemu cobas 4800) bardzo toksyczne gazy. Bufor Tris P261 Unika wdychania py u/dymu/gazu/ mg y/par/rozpylonej cieczy. EDTA ® cobas 4800 System 10 x 0,9 ml P280 Stosowa r kawice ochronne/ Chlorek wapnia Lysis Kit 1 ochron oczu/ochron twarzy. Octan wapnia (Zestaw do lizy 1 P284 Stosowa indywidualne rodki ® w systemie cobas 4800) < 2,0% proteinazy K ochrony dróg oddechowych. Gliceryna 240 testów P304 + P340 + P312 W PRZYPADKU DOSTANIA SI DO DRÓG (P/N: 06768253190) ODDECHOWYCH: Wyprowadzi lub wynie poszkodowanego na wie e powietrze i zapewni mu warunki do swobodnego oddychania. W przypadku ego samopoczucia skontaktowa si z O RODKIEM ZATRU lub z lekarzem. P305 + P351 + P338 + P310 W PRZYPADKU DOSTANIA SI DO OCZU: Ostro nie p uka wod przez SDS kilka minut. Wyj soczewki kontaktowe, ® (Odczynnik SDS systemu cobas 4800) je eli s i mo na je atwo usun . Nadal Bufor Tris-HCl 10 x 3 ml uka . Natychmiast skontaktowa si Dodecylosiarczanu sodu z O RODKIEM ZATRU /lekarzem. 0,09% azydku sodu P342 + P311 W przypadku wyst pienia objawów ze strony uk adu oddechowego: Skontaktowa si z O RODKIEM ZATRU /lekarzem. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 9 cobas® Cdiff Test Zestaw/kasety Elementy i sk adniki odczynników Ilo na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie Niebezpiecze stwo H302 + H332 Dzia a szkodliwie po LYS-1 po kni ciu i w nast pstwie wdychania. (Bufor do lizy 1 w systemie H317 Mo e powodowa reakcj ® cobas 4800) alergiczn skóry. Cytrynian sodu 10 x 96 testów H318 Powoduje powa ne uszkodzenie oczu. 5% polidokanol H334 Mo e powodowa objawy alergii 42,6% tiocyjanianu guanidyny lub astmy lub trudno ci w oddychaniu Ditiotreitol w nast pstwie wdychania. H412 Dzia a szkodliwie na organizmy wodne, powoduj c d ugotrwa e skutki. EUH032 W kontakcie z kwasami uwalnia bardzo toksyczne gazy. P261 Unika wdychania py u/dymu/gazu/ mg y/par/rozpylonej cieczy. ® cobas 4800 System PK P280 Stosowa r kawice ochronne/ Lysis Kit 1 ® ochron oczu/ochron twarzy. (Proteinaza K systemu cobas 4800) (Zestaw do lizy 1 P284 Stosowa indywidualne rodki ® w systemie cobas 4800) Bufor Tris ochrony dróg oddechowych. EDTA 960 testów P304 + P340 + P312 W PRZYPADKU 20 × 1,2 ml Chlorek wapnia DOSTANIA SI DO DRÓG (P/N: 06768270190) ODDECHOWYCH: Wyprowadzi lub Octan wapnia wynie poszkodowanego na wie e < 2,0% proteinazy K powietrze i zapewni mu warunki do swobodnego oddychania. W przypadku Gliceryna ego samopoczucia skontaktowa si z O RODKIEM ZATRU lub z lekarzem. P305 + P351 + P338 + P310 W PRZYPADKU DOSTANIA SI DO OCZU: Ostro nie p uka wod przez kilka minut. Wyj soczewki kontaktowe, SDS je eli s i mo na je atwo usun . Nadal ® uka . Natychmiast skontaktowa si (Odczynnik SDS systemu cobas 4800) z O RODKIEM ZATRU /lekarzem. Bufor Tris-HCl 10 × 9 ml P342 + P311 W przypadku wyst pienia Dodecylosiarczanu sodu objawów ze strony uk adu oddechowego: Skontaktowa si z O RODKIEM 0,09% azydku sodu ZATRU /lekarzem. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 10 cobas® Cdiff Test Zestaw/kasety Elementy i sk adniki odczynników Ilo na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie ® cobas 4800 System Wash Buffer Kit (Zestaw buforu ucz cego do systemu ® cobas 4800) 240 testów (P/N: 05235863190) Nie dotyczy WB ® (Bufor p ucz cy systemu cobas 4800) Cytrynian sodu dwuwodny 10 x 55 ml 0,05% N-metyloizotiazolonu HCl ® cobas 4800 System Wash Buffer Kit (Zestaw buforu ucz cego do systemu ® cobas 4800) 960 testów (P/N: 05235871190) Nie dotyczy WB ® (Bufor p ucz cy systemu cobas 4800) Cytrynian sodu dwuwodny 10 x 200 ml 0,05% N-metyloizotiazolonu HCl IC-1 ® cobas 4800 System Internal Control Kit 1 (Zestaw kontroli wewn trznej 1 systemu ® cobas 4800) 20 przebiegów (P/N: 06768318190) 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 Nie dotyczy (Kontrola wewn trzna 1 systemu ® cobas 4800) Bufor Tris EDTA < 0,01% poli-rA RNA (syntetycznego) 20 przebiegów 0,05% azydku sodu < 0,01% niezaka nego, syntetycznego DNA do kontroli wewn trznej, op aszczonego bia kiem kapsydowym bakteriofaga lambda 11 cobas® Cdiff Test Zestaw/kasety Elementy i sk adniki odczynników Ilo na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie Nie dotyczy Cdiff MMX ® (Odczynnik Master Mix cobas Cdiff) Bufor trycynowy EDTA DMSO Octan potasu ® cobas 4800 Cdiff Amplification/Detection Kit (Zestaw do amplifikacji/ ® detekcji systemu cobas 4800 Cdiff) 80 testów (P/N: 06768237190) Wodorotlenek potasu Tween 20 < 0,19% dATP, dCTP, dGTP, dUTP < 0,01% roztworu starterów sensownych i antysensownych dla C. difficile oraz kontroli wewn trznej 10 x 8 testów < 0,01% roztworu znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym sond dla C. difficile oraz kontroli wewn trznej < 0,01% aptameru oligonukleotydowego < 0,01% polimerazy DNA Z05 (bakteryjnej) < 0,02% enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylazy) (bakteryjnej) 0,09% azydku sodu Cdiff MMX Nie dotyczy ® (Odczynnik Master Mix cobas Cdiff) Bufor trycynowy EDTA DMSO Octan potasu ® cobas 4800 Cdiff Amplification/Detection Kit (Zestaw do amplifikacji/ ® detekcji systemu cobas 4800 Cdiff) 240 testów (P/N: 06768261190) Wodorotlenek potasu Tween 20 < 0,19% dATP, dCTP, dGTP, dUTP < 0,01% roztworu starterów sensownych i antysensownych dla C. difficile oraz kontroli wewn trznej 10 x 24 testy < 0,01% roztworu znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym sond dla C. difficile oraz kontroli wewn trznej < 0,01% aptameru oligonukleotydowego < 0,01% polimerazy DNA Z05 (bakteryjnej) < 0,02% enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylazy) (bakteryjnej) 0,09% azydku sodu 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 12 cobas® Cdiff Test Zestaw/kasety Elementy i sk adniki odczynników Ilo na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie Nie dotyczy Cdiff (+) C ® (Kontrola dodatnia cobas Cdiff) Bufor Tris EDTA 10 zestawów < 0,01% poli-rA RNA (syntetycznego) 0,05% azydku sodu < 0,01% niezaka nego plazmidu DNA (bakteryjnego) zawieraj cego sekwencj C. difficile ® cobas 4800 Cdiff Controls and Cofactor Kit (Zestaw kontroli i kofaktora Cdiff systemu ® cobas 4800) 10 przebiegów (P/N: 06768300190) (–) C Nie dotyczy (Kontrola ujemna systemu ® cobas 4800) Bufor Tris 10 zestawów EDTA 0,05% azydku sodu < 0,01% poli-rA RNA (syntetycznego) Cofactor-3 Nie dotyczy ® (Kofaktor-3 systemu cobas 4800) Octan manganu Octan magnezu Albumina surowicy bydl cej z osocza bydl cego, pozyskana w Stanach Zjednoczonych 10 przebiegów 0,09% azydku sodu Przechowywanie i u ytkowanie odczynników Odczynnik Temperatura przechowywania ® cobas 4800 System Sample Preparation Kit ® (Zestaw do przygotowywania próbek w systemie cobas 4800) 2–8°C Zachowuje trwa do momentu up ywu wskazanej daty wa no ci. 2–8°C Zachowuje trwa do momentu up ywu wskazanej daty wa no ci. 2–8°C Zachowuje trwa do momentu up ywu wskazanej daty wa no ci. 2–8°C Zachowuje trwa do momentu up ywu wskazanej daty wa no ci. 2–8°C Zachowuje trwa do momentu up ywu wskazanej daty wa no ci. 15–25°C Zachowuje trwa do momentu up ywu wskazanej daty wa no ci. ® cobas 4800 System Lysis Kit 1 ® (Zestaw do lizy 1 w systemie cobas 4800) ® cobas 4800 System Internal Control Kit 1 ® (Zestaw kontroli wewn trznej 1 systemu cobas 4800) ® cobas 4800 Cdiff Amplification/Detection Kit ® (Zestaw do amplifikacji/detekcji systemu cobas 4800 Cdiff) ® cobas 4800 Cdiff Controls and Cofactor Kit ® (Zestaw kontroli i kofaktora Cdiff systemu cobas 4800) ® cobas 4800 System Wash Buffer Kit ® (Zestaw buforu p ucz cego do systemu cobas 4800) Czas przechowywania Uwaga: Nie nale y zamra odczynników. Dat wa no ci odczynników okre lono w oparciu o skoordynowany czas uniwersalny (UTC). Lokalny czas wa no ci odczynników mo na okre li , dodaj c lub odejmuj c maksymalnie 12 godzin w zale no ci od czasu miejscowego w odniesieniu do czasu UTC. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 13 cobas® Cdiff Test Wymagane materia y dodatkowe Materia y P/N Ko cówki CORE, 1000 µl, statyw zawieraj cy 96 sztuk 04639642001 Pojemnik na odczynnik 50 ml 05232732001 Pojemnik na odczynnik 200 ml 05232759001 ytka (g bokodo kowa) do ekstrakcji w systemie ® cobas 4800 05232716001 ytka AD 0,3 ml (z mikrodo kami) i folia uszczelniaj ca ® systemu cobas 4800 05232724001 Aplikator folii uszczelniaj cej 04900383001 No nik 24-pozycyjny 04639502001 Worek na odpady sta e 05530873001 (ma y) lub 04691989001 (du y) Plastikowa zsuwnia Hamilton STAR 04639669001 ® 07051891190 ® 07958030190 cobas PCR Media and Swab Sample Kit cobas PCR Media Uni Swab Sample Kit kawice jednorazowe bezpudrowe Akceptowalne s jakiekolwiek bezpudrowe r kawice jednorazowe. Mieszad o wibracyjne (do mieszania jednej probówki) Akceptowalne jest dowolne mieszad o wibracyjne. Wirówka laboratoryjna, wyposa ona w b ben wirówki o minimalnej warto ci RCF równej 1500 Akceptowalna jest dowolna wirówka spe niaj ca te wymagania. W celu uzyskania dodatkowych informacji dotycz cych materia ów sprzedawanych oddzielnie prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche. Materia y opcjonalne Materia y P/N Maty zamykaj ce lub pokrywa p ytki g bokodo kowej Roche 04789288001 lub Hamilton 6474-01 Korki, bezbarwne (do ponownego zamykania przetworzonych próbek pierwotnych) Roche P/N 07958056190; do ponownego zamykania przetworzonych próbek w okr odennych probówkach 13 ml W celu uzyskania dodatkowych informacji dotycz cych materia ów opcjonalnych prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 14 cobas® Cdiff Test Urz dzenia i oprogramowanie wymagane, lecz niedostarczane Wymagane urz dzenia i oprogramowanie, lecz niedostarczane ® System cobas 4800 Aparat cobas x 480 Analizator cobas z 480 Jednostka steruj ca ® ® Oprogramowanie cobas Cdiff AP systemu cobas 4800 w wersji 1.0.1 lub nowsze ® Oprogramowanie aplikacyjne (podstawowe) systemu cobas 4800 w wersji 2.1.0 lub nowsze W celu uzyskania dodatkowych informacji dotycz cych materia ów sprzedawanych oddzielnie prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche. Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania Ostrze enia i rodki ostro no ci Podobnie jak w przypadku ka dej procedury testowej, dla prawid owego przeprowadzenia badania kluczowe znaczenie ma zachowanie zasad dobrej praktyki laboratoryjnej. Z uwagi na wysok czu analityczn niniejszego testu nale y przedsi wzi wyj tkow ostro no , u ywaj c odczynników, próbek oraz mieszanin do amplifikacji, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Do stosowania wy cznie w diagnostyce in vitro. Nale y unika mikrobiologicznego i przez DNA zanieczyszczenia odczynników i próbek. Karty charakterystyki (Safety Data Sheet, SDS) s dost pne na danie w miejscowym przedstawicielstwie firmy Roche. Odczynnik LYS-1 zawiera tiocyjanian guanidyny. Nie dopu ci do bezpo redniego kontaktu mi dzy tiocyjanianem guanidyny i podchlorynem sodu (wybielacz) ani innymi wysoce reaktywnymi odczynnikami, takimi jak kwasy lub zasady. Takie mieszaniny mog wydziela truj ce gazy. Odczynnik MGP zawiera izopropanol i jest wysoce atwopalny. Nale y przechowywa go z dala od otwartego ognia i potencjalnych róde iskier. Nie wolno nara odczynnika MGP na dzia anie róde pola magnetycznego. Odczynniki EB, Cdiff MMX, SDS, Cofactor-3, (–)C, Cdiff (+)C oraz IC-1 zawieraj azydek sodu. Dodatkowe ostrze enia, rodki ostro no ci oraz procedury maj ce na celu zredukowanie ryzyka zaka enia, dotycz ce aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 mo na znale w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800. W przypadku podejrzenia wyst pienia zanieczyszczenia nale y przeprowadzi czyszczenie oraz konserwacj tygodniow zgodnie z opisem zamieszczonym w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800. Uwaga: Szczegó owe instrukcje zamieszczono w cz ci „Pobieranie, transport i przechowywanie próbek”. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 15 cobas® Cdiff Test Dobra praktyka laboratoryjna Nie nale y pipetowa za pomoc ust. Nie wolno je , pi ani pali w obszarach roboczych laboratorium. Po zako czeniu pracy z próbkami i odczynnikami testowymi nale y dok adnie umy r ce. Podczas pracy z jakimikolwiek odczynnikami nale y u ywa os on na oczy oraz fartuchów laboratoryjnych i r kawic jednorazowych. Nale y unika kontaktu wymienionych materia ów ze skór , oczami i b onami luzowymi. Je eli dojdzie do kontaktu, miejsce jego wyst pienia nale y natychmiast sp uka du ilo ci wody. Je eli nie zostan podj te odpowiednie dzia ania lecznicze, mo e doj do oparze . W razie rozlania przed wytarciem nale y rozcie czy wod . Dok adnie oczy ci i odkazi wszystkie laboratoryjne powierzchnie robocze wie o przygotowanym roztworem 0,5% podchlorynu sodu w wodzie destylowanej lub dejonizowanej (rozcie czy domowy wybielacz w stosunku 1:10). Nast pnie nale y przetrze powierzchni 70% etanolem. Zanieczyszczenie W celu zapobie enia zanieczyszczeniu konieczne jest noszenie r kawic i ich zmiana pomi dzy prac z próbkami i odczynnikami testu cobas® Cdiff. Podczas pracy z próbkami i kontrolami nale y unika zanieczyszczenia r kawic. Podczas obchodzenia si z próbkami i zestawem odczynników nale y nosi jednorazowe r kawice, fartuchy laboratoryjne oraz os on oczu. Nale y unika mikrobiologicznego i przez rybonukleazy zanieczyszczenia odczynników. Je eli w trakcie obchodzenia si z próbkami i ich przetwarzania nie jest mo liwa odpowiednia kontrola przeniesienia mi dzy próbkami, mo e doj do wyst pienia wyników fa szywie dodatnich. Z próbkami nale y obchodzi si tak jak z materia em zaka nym, stosuj c laboratoryjne procedury bezpiecze stwa, takie jak okre lone w dokumentach: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories24 oraz CLSI Document M29-A425. Integralno Nie wolno u ywa zestawów po up ywie daty wa no ci. Nie nale y poddawa odczynników pulowaniu. Nie wolno u ywa przedmiotów jednorazowego u ytku po up ywie daty wa no ci. Wszystkie przedmioty jednorazowego u ytku s przeznaczone do jednokrotnego u ycia. Nie wykorzystywa ponownie. Ca e wyposa enie powinno by odpowiednio konserwowane, zgodnie z instrukcjami producenta. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 16 cobas® Cdiff Test Utylizacja Odczynniki systemu cobas® 4800 oraz odczynniki swoiste dla testu cobas® Cdiff zawieraj azydek sodu (patrz rozdzia „Ostrze enia i rodki ostro no ci”). Azydek sodu mo e reagowa z instalacjami wodno-kanalizacyjnymi wykonanymi z o owiu lub miedzi, tworz c silnie wybuchowe azydki metali. Usuwaj c roztwory zawieraj ce azydek sodu do zlewów laboratoryjnych, nale y przep uka rury du ilo ci zimnej wody, aby zapobiec nagromadzeniu azydków. Nale y wyrzuci wszystkie nieu yte odczynniki, post puj c zgodnie z przepisami krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi. Uwaga: Informacje dotycz ce usuwania odpadów p ynnych zamieszczono w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800. Rozlanie p ynów i czyszczenie Odczynnik LYS-1 zawiera tiocyjanian guanidyny. Je li p yn zawieraj cy tiocyjanian guanidyny ulegnie rozlaniu, do czyszczenia nale y u ywa odpowiedniego detergentu laboratoryjnego i wody. Je li rozlany p yn zawiera potencjalne czynniki zaka ne, do czyszczenia nale y NAJPIERW u ywa detergentu laboratoryjnego i wody, a nast pnie 0,5% roztworu podchlorynu sodu. Je li do rozlania p ynu dojdzie na powierzchni aparatu cobas® 4800, nale y post powa zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800 w celu przeprowadzenia czyszczenia. Do czyszczenia aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 nie wolno u ywa roztworu podchlorynu sodu (wybielacz). Czyszczenia aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 nale y dokonywa zgodnie z procedurami opisanymi w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800. Pobieranie, transport i przechowywanie próbek Uwaga: Ze wszystkimi próbkami nale y obchodzi si jak z materia em potencjalnie zaka nym. Pobieranie próbek Próbk nieuformowanego stolca nale y pobra do ja owego pojemnika. Próbki nale y pobiera zgodnie z procedur okre lon w standardowych procedurach roboczych placówki. Przechowywanie i trwa próbek podczas transportu Próbki nieuformowanego stolca zachowuj trwa w temperaturze 2–30°C przez 2 dni lub w temperaturze 2–8°C przez 7 dni b –20°C przez 60 dni przed przeprowadzeniem oznaczenia w systemie cobas® 4800 (wykazano to przez oznaczanie próbek po przechowywaniu kolejno w temp. 30°C ±1°C przez 2 dni, w temp. 2–8°C przez 5 dni, a nast pnie w temp. –20°C przez 60 dni). Próbki stolca wymieszane z pod em PCR cobas® zachowuj trwa w temperaturze 2–8°C przez 60 dni lub w temperaturze 30°C przez 7 dni przed wykonaniem oznaczenia w systemie cobas® 4800. Próbki bakterii C. difficile musz by transportowane zgodnie z przepisami krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi dotycz cymi transportu czynników etiologicznych. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 17 cobas® Cdiff Test Procedura testowa Wykonywanie oznaczenia Przebieg pracy ® Rysunek 1: Przebieg pracy z u yciem testu cobas Cdiff 1 Uruchomienie systemu. 2 Wykonanie czynno ci konserwacyjnych w odniesieniu do aparatu. 3 Wyj cie próbek i odczynników z miejsca przechowywania. 4 Rozpocz cie przebiegu: Umieszczenie no ników z próbkami. 5 W przypadku korzystania z systemu LIS: potwierdzenie zlecenia pracy. W przypadku braku systemu LIS: utworzenie zlecenia pracy. 6 Umieszczenie materia ów eksploatacyjnych (p ytki g bokodo kowej, p ytki mikrodo kowej, statywów na ko cówki) i odczynników. 7 Rozpocz cie przebiegu przygotowania próbek. 8 Wyj cie i uszczelnienie p ytki mikrodo kowej. 9 Wyj cie próbek, zu ytych odczynników i p ytki g bokodo kowej. 10 Umieszczenie p ytki mikrodo kowej w analizatorze. 11 Przeanalizowanie wyników. 12 W przypadku korzystania z systemu LIS: przes anie wyników do systemu LIS. 13 Wyj cie p ytki z analizatora. Instrukcja u ytkowania Wszystkie odczynniki, poza odczynnikami Cdiff MMX i Cofactor-3, przed za adowaniem do aparatu cobas x 480 musz znajdowa si w temperaturze pokojowej. Odczynniki Cdiff MMX i Cofactor-3 mo na umieszcza w aparacie bezpo rednio z temperatury przechowywania 2–8°C, poniewa ich temperatura zostanie wyrównana do temperatury otoczenia wewn trz aparatu cobas x 480 podczas procesu przetwarzania. Uwaga: Szczegó owe instrukcje obs ugi mo na znale w odpowiednim Podr czniku ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 18 cobas® Cdiff Test Wielko przebiegu W systemie cobas® 4800 mo na prowadzi jednocze nie testy cobas® MRSA/SA, cobas® Cdiff oraz cobas® HSV 1 i 2 w ramach po czenia ró nych partii w tym samym przebiegu. Ogólny zestaw do przygotowywania próbek w systemie cobas® 4800, ogólny zestaw do lizy 1 w systemie cobas® 4800 oraz ogólny zestaw buforu p ucz cego do systemu cobas® 4800 s dost pne w dwóch wielko ciach, z których ka da wystarcza na 10 przebiegów zawieraj cych do 24 lub 96 próbek w czaj c kontrole i próbki dla wszystkich oznacze do przeprowadzenia. Zestaw do amplifikacji/detekcji Cdiff w systemie cobas® 4800 jest dost pny w dwóch wielko ciach, z których ka da wystarcza do przeprowadzenia analizy maksymalnie 80 lub 240 próbek obejmuj cych kontrole Cdiff oraz próbki do oznaczenia. Zale nie od potrzeb w jednym przebiegu mo na wykorzysta kilka fiolek odczynnika cobas® 4800 Cdiff Master Mix pod warunkiem, e pochodz one z zestawów o tym samym rozmiarze. Ogólny zestaw kontroli wewn trznej 1 systemu cobas® 4800 oraz zestaw kontroli i kofaktora Cdiff systemu cobas® 4800 s dost pne w zestawie o jednym rozmiarze, który mo e zosta wykorzystany we wszystkich konfiguracjach przebiegu. Na ka dy przebieg zawieraj cy próbki C. difficile nale y u jedn dodatni kontrol Cdiff systemu cobas® 4800 i jedn kontrol ujemn systemu cobas® 4800 (patrz rozdzia „Kontrola jako ci”). W przypadku przebiegu z jednym testem maksymalna dopuszczalna liczba próbek to 94 próbki pacjentów i 2 kontrole. Uwaga: Chocia nie stanowi to optymalnego u ycia odczynników, w przebiegu zawieraj cym cznie 1–22 próbek mo na u odczynnika ogólnego zestawu 96 testów. Jednak nie mo na czy ze sob ró nych wielko ci zestawu buforu p ucz cego (WB) systemu cobas® 4800, zestawu do przygotowywania próbek w systemie cobas® 4800 oraz zestawu do lizy 1 w systemie cobas® 4800. Przyk adowo, je li na pocz tku przebiegu skanowana jest butelka z odczynnikiem WB z zestawu 96 testów, nale y u odczynników z pozosta ych dwóch zestawów równie o rozmiarze 96 testów. Uwaga: Chocia nie stanowi to optymalnego u ycia odczynników, w przebiegu zawieraj cym 1–6 próbek bakterii C. difficile mo na u odczynnika MMX zestawu 24 testów Cdiff w systemie cobas® 4800. Szczegó owe informacje dotycz ce zmiany wielko ci zestawu zamieszczono w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff oraz w rozdziale „Wk adanie odczynników”. Przebieg pracy Test cobas® Cdiff to oznaczenie prowadzone z wykorzystaniem przebiegu pracy Full Workflow w ramach oprogramowania cobas® 4800. Obejmuje on przygotowanie próbek w aparacie cobas x 480 oraz amplifikacj /detekcj w analizatorze cobas z 480. Przebieg mo e obejmowa tylko oznaczenie Cdiff lub dodatkowo testy cobas® MRSA/SA i/lub cobas® HSV 1 oraz 2 w ramach po czenia ró nych partii. Szczegó owe informacje zamieszczono w rozdziale „Przeprowadzanie przebiegu pracy Full Workflow” oraz w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 19 cobas® Cdiff Test Przenoszenie próbek do probówek z pod ® em cobas PCR 1. U yj jednej poliestrowej wymazówki do przeniesienia stolca do probówki z pod em cobas® PCR. Wyrzu drug wymazówk znajduj si w opakowaniu (je li dotyczy). Nie dotykaj c cianek pojemnika ze stolcem, zanurz ca kowicie ko cówk wymazówki w próbce stolca, a do ko ca sto kowej cz ci, a nast pnie szybko j wyjmij i umie wymazówk z inokulatem w probówce z pod em cobas® PCR. Nie nale y wykonywa oznaczenia, je li ilo próbki stolca nie umo liwia ca kowitego zanurzenia ko cówki wymazówki. 2. Przyciskaj c trzonek wymazówki do ciany probówki, prze am go w miejscu szarego oznaczenia naci cia. Zamknij probówk korkiem i zworteksuj przez co najmniej 5 sekund. Zdejmij korek i umie probówk (probówki) w 24-pozycyjnym no niku próbek w celu przetworzenia. Wyrzu korki. Uwaga: Test cobas® Cdiff zosta zatwierdzony do stosowania w po czeniu z zestawem do pobierania próbek z wymazówk i pod em cobas® PCR Media and Swab Sample Kit oraz z zestawem do pobierania próbek z wymazówk pojedyncz i pod em cobas® PCR Media Uni Swab Sample Kit. Nie nale y korzysta z innych rodzajów urz dze i pod y. Uwaga: Do przenoszenia stolca nale y korzysta wy cznie z jednej poliestrowej wymazówki. Przeniesienie do probówki z pod em cobas® PCR nadmiaru stolca mo e spowodowa powstanie grudek i/lub uzyskanie niewa nych wyników. Uwaga: Próbki stolca nale y przenie do probówek z pod em cobas® PCR oznakowanych odpowiednim kodem kreskowym umo liwiaj cym przetwarzanie w aparacie cobas x 480. W celu uzyskania informacji na temat procedur w ciwego kodowania kreskowego nale y zapozna si z odpowiednim Podr cznikiem systemu — system cobas® 4800 oraz list kodów kreskowych dopuszczalnych w systemie cobas® 4800. Uwaga: Aby unikn zanieczyszczenia krzy owego zawiesin próbek stolca w pod u cobas® PCR, do ponownego zamykania probówek po przetworzeniu nale y u ywa dodatkowych korków do pojemników na próbki w pod u cobas® PCR w innym kolorze (bezbarwnych; patrz rozdzia „Materia y opcjonalne”). Uwaga: Obj to pod a cobas® PCR wystarcza do przeprowadzenia kilkukrotnych oznacze próbek zawiesiny stolca w systemie cobas® 4800. Minimalna obj to zawiesiny stolca konieczna do przeprowadzenia przebiegu testu cobas® Cdiff to 3 ml w probówce z po ywk cobas® PCR. ® Wykonywanie testu cobas Cdiff Uwaga: Mo liwe jest przeprowadzenie testów cobas® MRSA/SA oraz cobas® Cdiff i/lub cobas® HSV 1 oraz 2 w ramach po czenia ró nych partii w tym samym przebiegu. Wi cej informacji mo na znale w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff. 1. Uruchom system i wykonaj procedury konserwacyjne, post puj c zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800 w cz ci „Konserwacja aparatu”. 2. Zgromad wszystkie wymagane odczynniki i materia y eksploatacyjne. W momencie rozpocz cia przebiegu odczynniki, z wyj tkiem odczynników cobas® Cdiff MMX oraz Cofactor-3, musz mie temperatur pokojow . 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 20 cobas® Cdiff Test Uwaga: Wszystkie odczynniki i pojemniki na odczynniki s opatrzone kodem kreskowym i s przeznaczone do jednokrotnego u ycia. Oprogramowanie cobas® 4800 ledzi u ycie odczynników oraz pojemników na odczynniki i odrzuca wcze niej u ywane odczynniki lub pojemniki na odczynniki. 3. Rozpocznij nowy przebieg i zdefiniuj dla niego zlecenie pracy. Zlecenie pracy mo na utworzy na trzy sposoby: Korzystaj c z edytora próbki przed umieszczeniem statywu z próbkami w aparacie cobas x 480 (przycisk „Editor” po prawej stronie menu g ównego). Zlecenia pracy mo na zapisa , edytowa i wczyta ponownie w razie potrzeby. Przez skorzystanie z kreatora oprogramowania dla nowego przebiegu i umieszczenie próbek w aparacie cobas x 480 po wy wietleniu takiego polecenia. Kody kreskowe próbek zostan automatycznie zeskanowane i konieczne b dzie zdefiniowane danych wyników dla ka dej próbki. Przez skorzystanie z systemu LIS placówki. Wi cej szczegó ów mo na znale w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff. Podczas wybierania danych wyników nale y zaznaczy opcj „Cdiff”. 4. Umie próbki i zdefiniuj/wybierz zlecenie pracy lub skorzystaj z systemu LIS, zale nie od tego co dzie w ciwe. Domy lnie zaznaczona jest opcja „Unload sample carriers after transferring to deep well plate”. Umo liwia to operatorowi pozyskanie pozosta ych próbek zawiesiny stolca tak szybko jak to mo liwe po pobraniu z nich porcji na potrzeby przetwarzania w aparacie cobas x 480. Je li konieczne jest przechowywanie, pojemniki z zawiesin stolca nale y zamkn nowym korkiem (patrz rozdzia „Materia y opcjonalne”). 5. Post puj zgodnie ze wskazówkami kreatora oprogramowania i za aduj materia y eksploatacyjne. Nie nale y umieszcza pojedynczych ko cówek ani ich wyjmowa z cz ciowo wykorzystanego statywu, gdy oprogramowanie ledzi liczb pozosta ych ko cówek. Je li liczba ko cówek b dzie niewystarczaj ca do przeprowadzenia przebiegu, oprogramowanie poinformuje o tym fakcie ytkownika. 6. Za aduj odczynniki do przygotowywania próbek do pojemników na odczynniki opatrzonych kodem kreskowym. Pojemniki na odczynniki s dost pne w dwóch rozmiarach: 200 ml i 50 ml. Post puj zgodnie ze wskazówkami kreatora oprogramowania w celu wybrania pojemnika na odczynniki odpowiednich rozmiarów. Kody kreskowe pojemnika na odczynniki musz znajdowa si po prawej stronie no nika. Za aduj odczynniki do przygotowywania próbek, stosuj c metod „zeskanuj, zeskanuj, w , umie ”: Zeskanuj kod kreskowy butelki odczynnika. Zeskanuj kod kreskowy pojemnika na odczynniki. odczynnik do pojemnika. Umie wype niony pojemnik na odczynniki w przypisanej mu pozycji w no niku na odczynniki. Uwaga: System cobas® 4800 ma wewn trzny zegar, kontroluj cy czas, przez jaki odczynniki znajduj si w systemie. Od momentu zeskanowania WB jest 1 godzina do zako czenia procesu adowania i klikni cia przycisku „Start”. Na zak adce „Workplace” wy wietlany jest zegar odliczaj cy czas. System nie zezwoli na rozpocz cie przebiegu, je eli czas wy wietlany przez zegar aparatu up yn . 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 21 cobas® Cdiff Test Uwaga: Aby zapewni w ciwe przeniesienie odczynnika MGP, zworteksuj lub energicznie wstrz nij fiolk odczynnika MGP niezw ocznie przed umieszczeniem jej w pojemniku na odczynniki. 7. Umie odczynniki do amplifikacji/detekcji (Cdiff MMX oraz Cofactor-3), proteinaz K (PK) i kontrole [Cdiff (+) C, IC oraz (–) C] bezpo rednio w no niku na odczynniki. W celu zapobie enia zanieczyszczeniu konieczna jest zmiana r kawiczek po pracy z kontrolami dodatnimi. Uwaga: Kreator oprogramowania obliczy optymaln ilo i wielko zestawu odczynnika MMX cobas® Cdiff do u ycia. Zostanie to odzwierciedlone w kolumnie „Kit size” na ekranie umieszczania odczynników MMX i Cofactor. Aby u odczynnika MMX cobas® Cdiff z zestawu o innym rozmiarze, kliknij przycisk „Change kit size”. 8. Po pomy lnym przebiegu przygotowania próbek przyciski „Sample Preparation results” oraz „Unload” stan si dost pne. W razie potrzeby wybierz przycisk „Sample Preparation results” w celu przeanalizowania wyników, a nast pnie wybierz przycisk „Unload”, aby wy adowa no niki na p ytki. Mo na równie wybra przycisk „Unload” w celu wy adowania no nika na p ytki bez przegl dania wyników. Patrz odpowiedni Podr cznik u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff. 9. Aby uszczelni p ytk mikrodo kow , przenie p ytk do analizatora cobas z 480 i rozpocz przebieg amplifikacji oraz detekcji, post puj zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff. Uwaga: System cobas® 4800 ma wewn trzny zegar, kontroluj cy czas, jaki up ywa od momentu dodania przygotowanych próbek do aktywowanego odczynnika Master Mix. Amplifikacj i detekcj nale y rozpocz jak najszybciej, jednak nie pó niej ni 90 minut od zako czenia przebiegu w aparacie cobas x 480. Na zak adce „Workplace” wy wietlany jest zegar odliczaj cy czas. System przerwie przebieg, je eli ten czas zostanie przekroczony. 10. Po zako czeniu procesu amplifikacji i detekcji wy aduj p ytk mikrodo kow z analizatora cobas z 480. 11. Post puj zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff w celu przeanalizowania i zatwierdzenia wyników. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 22 cobas® Cdiff Test Wyniki Kontrola jako ci i wa no wyników Ka dy przebieg obejmuje jeden zestaw kontroli dodatniej i ujemnej testu cobas® Cdiff. W przypadku ka dego przebiegu, aby przez oprogramowanie cobas® 4800 zosta y wy wietlone mo liwe do zaraportowania wyniki testu cobas® Cdiff, musz zosta uzyskane wa ne wyniki zarówno dla kontroli dodatniej, jak i ujemnej. Kontrola dodatnia Kontrola dodatnia Cdiff (+) zawiera niezaka ny DNA plazmidowy bakterii C. difficile. U ycie kontroli Cdiff (+) umo liwia monitorowanie etapów izolacji kwasu nukleinowego, amplifikacji i detekcji w danym przebiegu. Wynik kontroli Cdiff (+) musi by oznaczony jako „Valid”. Je eli wyniki kontroli Cdiff (+) s stale niewa ne, skontaktuj si z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche w celu uzyskania pomocy technicznej. Kontrola ujemna Wynik kontroli (–) musi by oznaczony jako „Valid”. Je eli wyniki kontroli (–) s stale niewa ne, skontaktuj si z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche w celu uzyskania pomocy technicznej. Kontrola wewn trzna Kontrola wewn trzna to rekombinowany fag lambda zawieraj cy sekwencje losowe oraz docelowe dla swoistych dla kontroli wewn trznej primerów i sondy. Kontrola wewn trzna jest dodawana do wszystkich próbek oraz kontroli dodatniej i ujemnej podczas przygotowywania próbek w aparacie cobas x 480. U ycie kontroli wewn trznej umo liwia monitorowanie etapów izolacji kwasu nukleinowego, amplifikacji i detekcji dla danej próbki. Kontrola wewn trzna jest równie wymagana do okre lania wa no ci kontroli danego przebiegu. Interpretacja wyników Uwaga: Ca y proces walidacji testu i przebiegu jest realizowany przez oprogramowanie cobas® 4800. Uwaga: Wa ny przebieg mo e obejmowa zarówno wa ne, jak i niewa ne wyniki próbek. W przypadku wa nego przebiegu wyniki badania próbek interpretuje si w sposób, który przedstawia Tabela 1. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 23 cobas® Cdiff Test ® Tabela 1 Interpretacja wyników testu cobas Cdiff ® Test cobas Cdiff POS Cdiff NEG Cdiff Raport wyniku i jego interpretacja Wynik dodatni dla Cdiff Wynik badania próbki na obecno DNA C. difficile jest dodatni. Wynik ujemny dla Cdiff* DNA C. difficile, je li jest obecne, mog o nie zosta wykryte. Wynik niewa ny Invalid Wynik testu jest niewa ny. W celu otrzymania wa nego wyniku ponownie przeprowad test oryginalnej próbki. Umie nowy korek na probówce z zawiesin stolca, w przypadku której uzyskano niewa ny wynik, i zworteksuj przez co najmniej 5 sekund. Dodaj 0,5 ml wymieszanej zawiesiny stolca do nowej probówki z po ywk ® cobas PCR. Zamknij probówk z rozcie czon zawiesin i zworteksuj przez co najmniej 5 sekund. Zdejmij korek i umie probówk z rozcie czon zawiesin w 24-pozycyjnym no niku próbek w celu przetworzenia. Brak wyników dla próbki Failed Zapoznaj si z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku u ytkownika ® ® systemu cobas 4800 dla testu cobas Cdiff dotycz cymi przegl dania oflagowa przebiegu i zalecanych czynno ci. W rzadkich przypadkach wyst pienia b du podczas pipetowania (np. z powodu grudki lub innej niedro no ci) nale y oryginaln probówk z zawiesin stolca zamkn nowym korkiem i umie ci w wirówce. Rozp wirówk do 1800 RCF (lub 1800 x g) i zatrzymaj. Dopilnuj, aby probówka nie by a wstrz sana ani nie zosta a wymieszana po wirowaniu. Zdejmij korek i umie probówk z zawiesin w 24-pozycyjnym no niku próbek w celu przetworzenia. * Wynik ujemny nie wyklucza obecno ci DNA C. difficile, poniewa wyniki s zale ne od odpowiedniego pobrania próbki, braku inhibitorów oraz obecno ci DNA w ilo ci umo liwiaj cej wykrycie. Niewa ne wyniki mog zosta uzyskane, je li próbka zawiera nadmiar stolca lub substancje hamuj ce, które uniemo liwiaj izolacj docelowego kwasu nukleinowego i/lub amplifikacj oraz detekcj . Znane substancje wp ywaj ce na wynik testu zamieszczono w rozdziale „Ograniczenia metody”. Uwaga: Minimalna obj to ® zawiesiny stolca wymagana do przeprowadzenia testu cobas Cdiff to 3 ml. Ograniczenia metody 1. Test cobas® Cdiff zosta zatwierdzony do u ycia wy cznie z próbkami nieuformowanego stolca przeniesionymi do pod a cobas® PCR zgodnie z informacjami zamieszczonymi w niniejszej instrukcji. 2. Uzyskanie wiarygodnych wyników zale y od w ciwego pobrania próbki, transportu, przechowywania oraz przetwarzania. Nale y post powa zgodnie z procedurami opisanymi w niniejszej instrukcji (okre lanej równie mianem ulotki do czonej do opakowania) oraz w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff. 3. Mo liwo wykrycia DNA C. difficile zale y od liczby mikroorganizmów znajduj cych si w próbce i mog na ni wp ywa metody pobierania/przetwarzania próbek, hospitalizacje w wywiadzie, schemat antybiotykoterapii i szczepy C. difficile. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 24 cobas® Cdiff Test 4. Wyniki fa szywie ujemne lub niewa ne mog wynika z wp ywu ró nych substancji. Do testu cobas® Cdiff do czona jest kontrola wewn trzna, aby pomóc w identyfikacji próbek zawieraj cych substancje mog ce zak óca izolacj kwasu nukleinowego i amplifikacj w trakcie reakcji PCR. Niektóre czynniki wp ywaj ce na wyniki testu s nast puj ce: Próbki zawieraj ce powy ej 25% (udzia wagowo-obj to ciowy) luzu mog dawa wyniki fa szywie ujemne. 5. Wynik dodatni wskazuje na obecno DNA C. difficile, jednak niekoniecznie potwierdza wyst powanie ywych mikroorganizmów. Z tego powodu wynik dodatni niekoniecznie musi wskazywa na niepowodzenie leczenia zaka enia. 6. Mutacje lub zmiany polimorficzne w obszarach wi zania primerów lub sond mog wp ywa na wykrywanie nowych lub nieznanych wariantów, co mo e skutkowa uzyskaniem fa szywie ujemnego wyniku testu cobas® Cdiff. 7. Warto predykcyjna oznaczenia zale y do cz sto ci wyst powania choroby w danej populacji. 8. Dodanie do odczynnika Master Mix cobas® 4800 Cdiff enzymu AmpErase umo liwia selektywn amplifikacj docelowego DNA; jednak aby unikn zanieczyszczenia odczynników i mieszanin amplifikacyjnych, konieczne jest stosowanie dobrej praktyki laboratoryjnej i dok adne przestrzeganie procedur wyszczególnionych w niniejszej instrukcji. 9. Tego produktu mog u ywa wy cznie osoby przeszkolone w zakresie technik PCR i u ywania systemu cobas® 4800. 10. Zatwierdzono u ycie tego produktu tylko z aparatem cobas x 480 i analizatorem cobas z 480. Z tym produktem nie mo na stosowa adnych innych urz dze do przygotowania próbek ani systemów do PCR. 11. Z uwagi na ró nice mi dzy technologiami zaleca si , aby przed rozpocz ciem korzystania z innej technologii u ytkownik przeprowadzi w laboratorium badania korelacji stosowanych metod w celu zidentyfikowania wyst puj cych mi dzy nimi ró nic technologicznych i sprawdzenia nowej procedury. 12. Zanieczyszczenie krzy owe próbek mo e spowodowa wyniki fa szywie dodatnie. System cobas® 4800 to zautomatyzowany aparat do PCR w czasie rzeczywistym opracowany w celu minimalizacji ryzyka zanieczyszczenia krzy owego podczas przetwarzania próbki oraz ekstrakcji, amplifikacji i detekcji kwasu nukleinowego. W celu sprawdzenia niezawodno ci systemu przeprowadzono symulowane, niekliniczne badanie naprzemienne na panelu zawieraj cym spreparowane próbki wysoko dodatnie i ujemne, aby oceni teoretyczny wspó czynnik zanieczyszczenia krzy owego systemu. Próbki wysoko dodatnie mia y warto ci Ct ni sze ni obserwowane w przypadku 95% pacjentów zaka onych w grupie docelowej. Wspó czynnik zanieczyszczenia krzy owego w tym badaniu naprzemiennym zosta okre lony jako 0,24% (1/423). Wspó czynniki zanieczyszczenia krzy owego w warunkach klinicznych zale od odsetka próbek wysoko dodatnich oraz cz sto ci wyst powania choroby. Rutynowe kliniczne wspó czynniki zanieczyszczenia krzy owego powinny by znacznie ni sze ni obserwowane w tym badaniu i nale y je oceni w warunkach u ytkownika. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 25 cobas® Cdiff Test Ocena skuteczno ci w badaniach nieklinicznych Czu analityczna Czu analityczn (granic wykrywalno ci [ang. Limit of Detection, LOD]) dla testu cobas® Cdiff okre lono, prowadz c analizy ocenionych ilo ciowo hodowli C. difficile rozcie czonych do kilku poziomów st w stanowi cych t o ujemnych próbkach zawiesiny stolca w pod u cobas® PCR. Wszystkie poziomy przebadano z u yciem testu cobas® Cdiff, korzystaj c z trzech niepowtarzalnych serii odczynników testu cobas® Cdiff. W przypadku ka dego poziomu przebadano co najmniej 21 powtórze na seri odczynnika. Granica wykrywalno ci (LOD) dla tego testu zosta a okre lona jako docelowe st enie, które mo e zosta wykryte jako dodatnie w 95% testowanych powtórze na podstawie wyników uzyskanych z u yciem serii odczynników o najni szej wydajno ci. Informacje dotycz ce siedmiu szczepów C. difficile wykorzystanych w badaniu czu zawiera Tabela 2. Tabela 2 ci analitycznej ® Granica wykrywalno ci (LOD) dla testu cobas Cdiff LOD (CFU/wymaz) Identyfikator szczepu Toksynotyp Typ REA* Typ † PFG Rybotyp Fenotyp ATCC 43255 (VPI 10463) 0 Nie dotyczy Nie dotyczy 087 ATCC BAA-1382 (630) 0 R 23 Nie dotyczy CDC 204118 III BI 8 R12087 (CD196) III 2748-06 Wed ug odsetka wyników dodatnich Wed ug analizy Probit A+B+CDT- 113 90 012 A+B+CDT- 81 83 NAP1 027 A+B+CDT+ 54 42 BI NAP1 027 A+B+CDT+ 54 54 V Nie dotyczy Nie dotyczy 078 Nie dotyczy 54 45 ATCC 43598 (1470) VIII Nie dotyczy Nie dotyczy 017 A-B+ 225 130 F15 XII Nie dotyczy Nie dotyczy Nie dotyczy Nie dotyczy 54 59 † * Analiza z wykorzystaniem enzymów restrykcyjnych. Elektroforeza elowa w polu pulsacyjnym. Detekcja genotypów bakterii C. difficile Granic wykrywalno ci testu cobas® Cdiff dla 28 szczepów toksynogennych reprezentuj cych dodatkowe toksynotypy zweryfikowano przez oznaczenie 40 powtórze na poziom przy kilku poziomach. Rozcie czenia i próbki testowe przygotowano w podobny sposób, jak w przypadku opisanego powy ej badania granicy wykrywalno ci (LOD). Najni szy poziom, w przypadku którego odsetek trafie wynosi co najmniej 95%, zawiera Tabela 3. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 26 cobas® Cdiff Test Wszystkie 28 szczepów toksynogennych (Tabela 3) zosta o wykrytych jako dodatnie w 95% powtórze badanych przy st eniach mieszcz cych si w zakresie od 77,9 CFU/wymaz do 460 CFU/wymaz. Tabela 3 Podsumowanie wyników weryfikacji toksynogennych szczepów C. difficile Szczep Toksynotyp Rybotyp St . (CFU/wymaz) Odsetek wyników dodatnich EX 623 I 102 77,9 95,0% AC 008 II 103 77,9 95,0% SE 844 IIIa 080 234 100,0% 55767 IV 023 77,9 100,0% SE 881 V 045 234 100,0% 51377 VI Nie dotyczy 234 100,0% 57267 VII 063 77,9 97,5% 51680 IX 019 77,9 100,0% 8864 X 036 77,9 97,5% R 9367 XIII 070 77,9 97,5% R 10870 XIV 111 234 100,0% R 9385 XV 122 234 100,0% SUC36 XVI 078 234 100,0% J9965 XVII Nie dotyczy 460 97,5% K095 XVIII 014 234 95,0% TR13 XIX Nie dotyczy 234 97,5% TR14 XX Nie dotyczy 77,9 100,0% CH6223 XXI Nie dotyczy 234 100,0% CD07-468 XXII Nie dotyczy 234 100,0% 8785 XXIII Nie dotyczy 234 95,0% 597B XXIV 131 234 97,5% 7325 XXV 027 234 100,0% 7459 XXVI Nie dotyczy 234 95,0% KK2443-2006 XXVII Nie dotyczy 234 100,0% CD08-070 XXVIII 126 234 97,5% CD07-140 XXIX 056 234 97,5% ES 130 XXX Nie dotyczy 234 100,0% WA 151 XXXI Nie dotyczy 460 100,0% 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 27 cobas® Cdiff Test Precyzja Wewn trzne badanie precyzji zosta o przeprowadzone z u yciem panelu sk adaj cego si z hodowli C. difficile rozcie czonych w ujemnych próbkach zawiesiny stolca w pod u cobas® PCR do st poni ej granicy wykrywalno ci (LOD), w pobli u warto ci LOD oraz powy ej warto ci LOD testu cobas® Cdiff. Przebadany zosta równie poziom ujemny sk adaj cy si wy cznie z zawiesiny stolca w pod u cobas® PCR. W badaniu wykorzystano trzy niepowtarzalne serie odczynników testu cobas® Cdiff oraz trzy aparaty, wykonuj c w sumie 36 przebiegów w ci gu 12 dni. Opis paneli precyzji oraz podsumowanie badania zawiera Tabela 4. Analiza czynników zmienno ci (Tabela 5) sugerowa a, e najwi ksza zmienno docelowych warto ci Ct jest przypisywana zmienno ci w ramach przebiegu (losowej) i czynnikom zale nym od serii (odpowiednio 60,0% oraz 25,3%) dla st równych lub zbli onych do warto ci LOD. W przypadku st przekraczaj cych warto LOD, wi kszo zmienno ci warto ci Ct jest przypisywana zmienno ci w ramach przebiegu (losowej) oraz czynnikom zale nym od aparatu (odpowiednio 72,5% oraz 24,7%). Wyniki (Tabela 6) pokazuj , e docelowe warto ci Ct mia y ogóln warto CV (%) równ 1,5% dla st równych warto ci LOD oraz 1,1% dla st powy ej warto ci LOD. Tabela 4 Wewn trzne badanie dok adno ci: analiza wyników dodatnich 95% CL Cz on panelu Liczba testowanych Liczba wyników dodatnich Odsetek wyników dodatnich Dolny Górny Ujemne 72 0 0,0% 0,0% 5,0% < 1 x LOD 72 21 29,2% 19,0% 41,1% ~ 1 x LOD 72 72 100,0% 95,0% 100,0% ~ 3 x LOD 72 72 100,0% 95,0% 100,0% LOD = granica wykrywalno ci Tabela 5 Analiza czynników zmienno ci dla cz onów panelu precyzji Czynniki zmienno ci/procent udzia u w wyniku ca kowitym Poziom rednia ~ 1 x LOD 38,5 ~ 3 x LOD 37,5 Razem Seria Aparat Wielko zestawu Dzie Losowe 0,0789 0,0189 0,0001 0,0270 0,1875 0,3123 25,25% 6,04% 0,03% 8,65% 60,03% 100,00% 0,0047 0,0404 0,0000 0,0000 0,1188 0,1638 2,84% 24,65% 0,00% 0,00% 72,51% 100,00% LOD = granica wykrywalno ci 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 28 cobas® Cdiff Test Tabela 6 Odchylenia standardowe oraz wspó czynniki zmienno ci (%) analizy dla cz onów panelu precyzji Czynniki SD/warto Poziom rednia ~ 1 x LOD 38,5 ~ 3 x LOD 37,5 procentowa CV Razem Seria Aparat Wielko zestawu 0,28 0,14 0,01 0,16 0,43 0,56 0,73% 0,36% 0,03% 0,43% 1,12% 1,45% 0,07 0,20 0,00 0,00 0,34 0,40 0,18% 0,54% 0,00% 0,00% 0,92% 1,08% Dzie Losowe LOD = granica wykrywalno ci Swoisto analityczna W celu przeprowadzenia oceny swoisto ci analitycznej testu cobas® Cdiff wykonano testy z u yciem nast puj cych paneli mikroorganizmów: 1) 103 bakterii, grzybów i wirusów, które mog wyst powa w próbkach ka u oraz jednej komórki ludzkiej (Tabela 7); 2) 28 mikroorganizmów z rodzaju Clostridium, w tym nietoksynogennych szczepów C. difficile (* na potrzeby badania cytomegalowirus (HHV5) zosta dodany w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 2,0 x 103 PFU/ml, ludzki adenowirus typu 40 w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 2,2 x 103 PFU/ml oraz ludzki rotawirus w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 9,8 x 103 PFU/ml — Tabela 8). Wszystkie bakterie i komórki ludzkie zosta y dodane w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 1 x 106 j.*/ml, natomiast wszystkie wirusy zosta y dodane w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 1 x 105 j.*/ml, z wyj tkiem cytomegalowirusa (HHV5), ludzkiego adenowirusa typu 40 oraz ludzkiego rotawirusa, które zosta y dodane w celu uzyskania ni szych st z powodu ogranicze zwi zanych ze st eniem roztworu podstawowego. Testy zosta y przeprowadzone z u yciem samych mikroorganizmów lub przy obecno ci jednego z dwóch izolatów szczepów C. difficile w st eniu wynosz cym 3-krotno granicy wykrywalno ci (LOD) testu cobas® Cdiff. Wyniki wskazuj , e aden z tych mikroorganizmów nie zak óca wykrywania docelowych typów Cdiff. W przypadku adnego z nich nie uzyskano fa szywie dodatniego wyniku przy braku docelowego typu C. difficile. Swoisto analityczn Clostridium botulinum potwierdzono z u yciem programu BLAST w porównaniu z baz danych sekwencji nukleotydowych GenBank w celu symulacji etapu tworzenia amplikonu PCR. * Ilo bakterii by a okre lana jako liczba jednostek tworz cych koloni (CFU)/ml, ilo ludzkich komórek by a podawana jako liczba komórek/ml, a ilo wirusów definiowano jako liczb jednostek tworz cych ysink (PFU)/ml, z wyj tkiem nast puj cych mikroorganizmów. Chlamydia trachomatis oznaczono ilo ciowo jedynie jako cia ko podstawowe (EB)/ml. Cytomegalowirus, ludzki echowirus oraz ludzki enterowirus oznaczono ilo ciowo jako IU/ml. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 29 cobas® Cdiff Test Tabela 7 Mikroorganizmy i komórki ludzkie Abiotrophia defectiva Acinetobacter baumannii Acinetobacter lwoffii Aeromonas hydrophila Alcaligenes faecalis subsp. faecalis Anaerococcus tetradius Bacillus cereus ATCC 11778 Bacillus cereus ATCC 13472 Bacteroides caccae Bacteroides merdae Bacteroides stercoris Bifidobacterium adolescentis Bifidobacterium longum Campylobacter coli Campylobacter jejuni Candida albicans Candida catenulata Cedecea davisae Chlamydia trachomatis Serovar L2 Citrobacter amalonaticus Citrobacter freundii Citrobacter koseri Citrobacter sedlakii Collinsella aerofaciens Corynebacterium genitalium Desulfovibrio piger Edwardsiella tarda Eggerthella lenta Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus casseliflavus Enterococcus cecorum Enterococcus dispar Enterococcus faecalis Enterococcus faecium vanA Enterococcus gallinarum vanC Enterococcus hirae Enterococcus raffinosus Escherichia coli ATCC 11775 Escherichia coli ATCC 25922 Escherichia fergusonii Escherichia hermannii Fusobacterium varium Gardnerella vaginalis Gemella morbillorum Hafnia alvei Ludzkie komórki HCT-15 Helicobacter fennelliae Helicobacter pylori Klebsiella oxytoca Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae Lactobacillus acidophilus Lactobacillus reuteri Lactococcus lactis Leminorella grimontii Listeria grayi Listeria innocua Listeria monocytogenes Mitsuokella multacida Mobiluncus curtisii Moellerella wisconsensis Morganella morganii Neisseria gonorrhoeae Peptoniphilus asaccharolyticus Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Porphyromonas asaccharolytica Prevotella melaninogenica Proteus mirabilis Proteus penneri Providencia alcalifaciens Providencia rettgeri Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Ruminococcus bromii Salmonella choleraesuis subsp. choleraesuis Salmonella enterica subsp. arizonae (f.k.a. Salmonella choleraesuis subsp. arizonae) Salmonella enterica subsp. enterica serovar Choleraesuis Serratia liquefaciens Serratia marcescens Shigella boydii Shigella dysenteriae Shigella sonnei Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Stenotrophomonas maltophilia Streptococcus agalactiae Streptococcus dysgalactiae Streptococcus intermedius Streptococcus uberis Trabulsiella guamensis Veillonella parvula Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Yersinia bercovieri Yersinia rohdei Cytomegalowirus (HHV5)* Ludzki adenowirus typu 40* Ludzki wirus Coxsackie A10 Ludzki enterowirus 11 Ludzki enterowirus 71 Ludzki rotawirus* Norowirus GII 3 * Na potrzeby badania cytomegalowirus (HHV5) zosta dodany w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 2,0 x 10 PFU/ml, 3 ludzki adenowirus typu 40 w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 2,2 x 10 PFU/ml, a ludzki rotawirus w ilo ci umo liwiaj cej 3 uzyskanie st enia 9,8 x 10 PFU/ml. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 30 cobas® Cdiff Test Tabela 8 Mikroorganizmy z rodzaju Clostridium, w tym nietoksynogenne szczepy C. difficile Clostridium beijerinckii Clostridium bifermentans Clostridium bolteae Clostridium botulinum* Clostridium butyricum Clostridium chauvoei Clostridium difficile serogrupa B (nietoksynogenne) Clostridium difficile serogrupa I (nietoksynogenne) Clostridium fallax Clostridium haemolyticum Clostridium histolyticum Clostridium innocuum Clostridium methylpentosum Clostridium nexile Clostridium novyi Clostridium orbiscindens (Flavonifractor plautii po zmianie nazwy) Clostridium paraputrificum Clostridium perfringens Clostridium ramosum Clostridium scindens Clostridium septicum Clostridium sordellii Clostridium sphenoides Clostridium spiroforme Clostridium sporogenes Clostridium symbiosum Clostridium tertium Clostridium tetani - - * Na podstawie programu BLAST. Substancje wp ywaj ce na wynik testu Pod k tem potencjalnego wp ywu na wyniki testu cobas® Cdiff przebadano 26 cz sto stosowanych leków, a tak e t uszcz wydalany ze ka em, krew pe i luz. Wszystkie substancje przebadano przy st eniach wy szych ni oczekiwane w przypadku ich pobierania na wymazówce wraz z próbk stolca. Ilo substancji wp ywaj cej na wynik testu jest wyra ana w postaci st enia w pierwotnej próbce stolca. Dwa izolaty szczepów C. difficile zosta y dodane w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie 3-krotno ci granicy wykrywalno ci (LOD) testu cobas® Cdiff i wykorzystane jako typy docelowe w tych testach. Nie stwierdzono wp ywu na wyniki testu w przypadku substancji egzogennych. W przypadku t uszczu wydalanego z ka em nie obserwowano wp ywu do st enia 28%, w przypadku krwi pe nej do poziomu 50%, a w przypadku luzu — do warto ci 25%. Podsumowanie tych wyników zawiera Tabela 9. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 31 cobas® Cdiff Test Tabela 9 Wyniki badania substancji wp ywaj cych na wynik testu Substancja St enie Wyniki 4–28% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu 25, 50% (udzia obj to ciowy) Brak wp ywu 25, 50% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu do 25% (udzia wagowo-obj.) Tums 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Wankomycyna 1% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu metronidazol 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu ® 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu 10% (udzia obj to ciowy) Brak wp ywu 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Krem Preparation H with Bio-Dyne (Wyeth) 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu GYNOL II 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Anusol Plus 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Filtr przeciws oneczny 1% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Czopki SAB-Dimenhydrinate (SABEX ) 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Olej mineralny 10% (udzia obj to ciowy) Brak wp ywu Naturalny rodek przeczyszczaj cy pochodzenia ro linnego Equate 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Dulcolax 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Fleet (CB Fleet Company) 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu K-Y Jelly/Gelée (McNeil-PPC) 1% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Aerozol donosowy Afrin Original 10% (udzia obj to ciowy) Brak wp ywu Wyci g wodny z oczaru wirginijskiego yn z 1 przetarcia/wymazówki Brak wp ywu Siarczan baru o wysokiej g sto ci E-Z-HD™ do sporz dzania zawiesiny (E-Z-EM Canada) 20% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Kwas palmitynowy 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Kwas stearynowy 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu Aleve 10% (udzia wagowo-obj.) Brak wp ywu uszcz wydalany z ka em Krew pe na luz Imodium AD rodek zmi kczaj cy stolec ® Pepto-Bismol (Procter & Gamble) Ma z nystatyn USP ® ® ® Krem przeciwko wi dowi Vagisil ® ® Monistat 7 Vaseline™ ® ® ® ® ® 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 32 cobas® Cdiff Test Korelacja Skuteczno testu cobas® Cdiff porównano z zatwierdzonym przez FDA i posiadaj cym oznakowanie CE najnowocze niejszym testem referencyjnym NAT, korzystaj c z oznacze cytotoksyczno ci hodowli tkankowej izolatów C. difficile z hodowli bezpo rednich jako metody referencyjnej. Próbki stolca zgromadzone w 3 szpitalach/o rodkach medycznych zosta y przebadane z u yciem testu cobas® Cdiff oraz referencyjnego testu NAT, a tak e przes ane do laboratorium referencyjnego w celu przeprowadzenia bada z u yciem hodowli tkankowej z ocen cytotoksyczno ci. Test cobas® Cdiff i najnowocze niejszy test referencyjny NAT zosta y wykonane zgodnie z instrukcjami producentów. Test cytotoksyczno ci w hodowli tkankowej zosta przeprowadzony z wykorzystaniem procedury hodowli bezpo redniej. Z ka dej próbki stolca pobrano inokulat umieszczany w zredukowanym wst pnie agarze zawieraj cym cykloseryn , cefoksytyn i fruktoz (CCFA-HT). Podejrzewane kolonie identyfikowano jako bakterie C. difficile za pomoc barwienia metod Grama, na podstawie nietolerancji warunków tlenowych i z u yciem testu Pro-Disk, a nast pnie inokulowano w bulionie mi snym do hodowli w warunkach beztlenowych. Supernatant pozyskany z hodowli w bulionie mi snym w warunkach beztlenowych zostanie nast pnie przetworzony w celu wykrycia toksyny B bakterii C. difficile z wykorzystaniem testu cytotoksyczno ci w hodowli tkankowej (test C. DIFFICILE TOX-B, Techlab). Do udzia u w badaniu zakwalifikowano w sumie 1434 pacjentów z pi ciu o rodków. Z powodu niekompletnych wyników wykluczono 156 pacjentów. W hodowli bezpo redniej wykryto 152 dodatnie próbki C. difficile (cz sto wyst powania: 11,9%). Dane dotycz ce skuteczno ci testu cobas® Cdiff i referencyjnego testu NAT w przypadku hodowli bezpo redniej zawiera Tabela 10 oraz Tabela 11. Tabela 10 ® Test cobas Cdiff a hodowla bezpo rednia Hodowla bezpo rednia Test cobas Cdiff Czu ® Dodatni Ujemny Razem Dodatni 147 30 177 Ujemny 5 1 096 1 101 Razem 152 1 126 1 278 i swoisto Czu i swoisto testu cobas® Cdiff w porównaniu z hodowl bezpo redni wynios y odpowiednio 96,7% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 92,5–98,6%) oraz 97,3% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 96,2–98,1%). 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 33 cobas® Cdiff Test Warto predykcyjna wyniku dodatniego i ujemnego Obserwowane warto ci predykcyjne wyniku dodatniego i ujemnego testu cobas® Cdiff dla próbek w badaniu wynios y odpowiednio 83,1% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 76,7–88,3%) oraz 99,5% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 98,9–99,9%). Tabela 11 Referencyjny test Nucleic Acid Test (NAT) w przypadku hodowli bezpo redniej Hodowla bezpo rednia Test referencyjny NAT Czu Dodatni Ujemny Razem Dodatni 147 29 176 Ujemny 5 1 097 1 102 Razem 152 1 126 1 278 i swoisto Czu i swoisto testu referencyjnego NAT w porównaniu z hodowl bezpo redni wynios y odpowiednio 96,7% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 92,5–98,6%) oraz 97,4% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 96,3–98,2%). Korelacja z testem referencyjnym NAT Dane dotycz ce skuteczno ci testu cobas® Cdiff w porównaniu z zatwierdzonym przez FDA i posiadaj cym oznakowanie CE najnowocze niejszym testem referencyjnym NAT zawiera Tabela 12. Tabela 12 ® Test cobas Cdiff w porównaniu z testem referencyjnym Nucleic Acid Test (NAT) Referencyjny test NAT Test cobas Cdiff ® Dodatni Ujemny Razem Dodatni 167 10 177 Ujemny 9 1 092 1 101 Razem 176 1 102 1 278 Odsetek zgodno ci wyników dodatnich i ujemnych Odsetek zgodno ci wyników dodatnich i ujemnych testu cobas® Cdiff w porównaniu z referencyjnym testem NAT wyniós odpowiednio 94,9% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 90,6–97,3%) oraz 99,1% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 98,3–99,5%). 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 34 cobas® Cdiff Test Dodatkowe informacje Najwa niejsze cechy oznaczenia Rodzaj próbki Próbki nieuformowanego stolca ® Wymagana ilo próbki ® 4,3 ml po ywki cobas PCR w fiolce pierwotnej, do wykonania testu cobas Cdiff wymagane s co najmniej 3 ml próbki. Czas trwania testu Wyniki s dost pne w ci gu 2,5 godziny po umieszczeniu próbki w systemie (1–22 próbek). Czu Od 54 do 460 CFU/wymaz w zale no ci od izolatu. analityczna Swoisto Nie stwierdzono reaktywno ci krzy owej ze 125 blisko spokrewnionymi mikroorganizmami lub mikroorganizmami wyst puj cymi typowo w próbkach stolca. Reprezentatywno Wszystkie znane szczepy C. difficile (toksynotypy 0–XXXI, z wyj tkiem nietoksynogennych toksynotypów XI), w tym odpowiedzialny za wybuchy epidemii hiperwirulentny szczep BI/NAP1/027. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 35 cobas® Cdiff Test Oznaczenia Na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR stosuje si nast puj ce oznaczenia. Tabela 13 Oznaczenia stosowane na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR Oprogramowanie pomocnicze Wyrób do diagnostyki in vitro Autoryzowany Przedstawiciel we Wspólnocie Europejskiej Dolna granica przypisanego zakresu Arkusz kodów kreskowych Wytwórca Kod partii Przechowywa z dala od wiat a Zagro enie biologiczne Zawarto Numer katalogowy Przestrzega zakresu temperatury Sprawd w instrukcji obs ugi Plik definicji testów Zawarto Górna granica przypisanego zakresu zestawu wystarczaj ca na <n> testów Dystrybucja Termin wa no ci Wy cznie do oceny dzia ania w badaniach IVD Numer pozycji handlu globalnego Ten produkt spe nia wymogi dyrektywy Wspólnoty Europejskiej 98/79/WE dotycz cej diagnostycznych urz dze medycznych do stosowania in vitro. Linia pomocy technicznej dla klientów w Stanach Zjednoczonych 1-800-526-1247 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 36 cobas® Cdiff Test Producent i dystrybutorzy Tabela 14 Producent i dystrybutorzy Roche Molecular Systems, Inc. 1080 US Highway 202 South Branchburg, NJ 08876 USA www.roche.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Str. 116 68305 Mannheim Germany Roche Diagnostics (Schweiz) AG Industriestrasse 7 6343 Rotkreuz, Switzerland Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, Germany Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, 171-173 E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Roche Diagnostica Brasil Ltda. Av. Engenheiro Billings, 1729 Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil Roche Diagnostics 201, boulevard Armand-Frappier H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Pour toute assistance technique, appeler le: 1-877-273-3433) Roche Diagnostics 2, Avenue du Vercors 38240 Meylan, France Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Viale G. B. Stucchi 110 20052 Monza, Milano, Italy Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal Znaki towarowe i patenty Patrz http://www.roche-diagnostics.us/patents Copyright ©2016 Roche Molecular Systems, Inc. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 37 cobas® Cdiff Test Pi miennictwo 1. Bartlett JG, Chang TW, Moon N, Onderdonk AB. Antibiotic-induced lethal enterocolitis in hamsters: studies with eleven agents and evidence to support the pathogenic role of toxinproducing Clostridia. Am J Vet Res. 1978;39(9):1525-1530. 2. Larson HE, Price AB, Honour P, Borrielo SP. Clostridium difficile and the aetiology of pseudomembranous colitis. Lancet. 1978;1(8073):1063-1066. 3. Bartlett JG. Clinical practice. Antibiotic-associated diarrhea. N Engl J Med. 2002;346(5):334-339. 4. McDonald LC, Owings M, Jernigan DB. Clostridium difficile infection in patients discharged from US short-stay hospitals, 1996-2003. Emerg Infect Dis. 2006;12(3):409-415. 5. Loo VG, Poirier L, Miller MA, et al. A predominantly clonal multi-institutional outbreak of Clostridium difficile-associated diarrhea with high morbidity and mortality. N Engl J Med. 2005;353(23):2442-2449. 6. Song X, Bartlett JG, Speck K, Naegeli A, Carroll K, Perl TM. Rising economic impact of clostridium difficile-associated disease in adult hospitalized patient population. Infect Control Hosp Epidemiol. 2008;29(9):823-828. 7. Wolfhagen MJ, Torensma R, Fluit AC, Verhoef J. Toxins A and B of Clostridium difficile. FEMS Microbiol Rev. 1994;13(1):59-64. 8. Johnson S, Sambol SP, Brazier JS, et al. International typing study of toxin A-negative, toxin Bpositive Clostridium difficile variants. J Clin Microbiol. 2003;41(4):1543-1547. 9. Barbut F, Decré D, Lalande V, et al. Clinical features of Clostridium difficile-associated diarrhoea due to binary toxin (actin-specific ADP-ribosyltransferase)-producing strains. J Med Microbiol. 2005;54(Pt 2):181-185. 10. Geric B, Rupnik M, Gerding DN, Grabnar M, Johnson S. Distribution of Clostridium difficile variant toxinotypes and strains with binary toxin genes among clinical isolates in an American hospital. J Med Microbiol. 2004;53(Pt 9):887-894. 11. Pépin J, Valiquette L, Alary ME, et al. Clostridium difficile-associated diarrhea in a region of Quebec from 1991 to 2003: a changing pattern of disease severity. CMAJ. 2004;171(5):466-472. 12. Warny M, Pepin J, Fang A, et al. Toxin production by an emerging strain of Clostridium difficile associated with outbreaks of severe disease in North America and Europe. Lancet. 2005;366(9491):1079-1084. 13. Bartlett JG. Narrative review: the new epidemic of Clostridium difficile-associated enteric disease. Ann Intern Med. 2006;145(10):758-764. 14. Fekety R. Guidelines for the diagnosis and management of Clostridium difficile-associated diarrhea and colitis. American College of Gastroenterology, Practice Parameters Committee. Am J Gastroenterol. 1997;92(5):739-750. 15. Peterson LR, Manson RU, Paule SM, et al. Detection of toxigenic Clostridium difficile in stool samples by real-time polymerase chain reaction for the diagnosis of C. difficile-associated diarrhea. Clin Infect Dis. 2007;45(9):1152-1160. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 38 cobas® Cdiff Test 16. Sloan LM, Duresko BJ, Gustafson DR, Rosenblatt JE. Comparison of real-time PCR for detection of the tcdC gene with four toxin immunoassays and culture in diagnosis of Clostridium difficile infection. J Clin Microbiol. 2008;46(6):1996-2001. 17. Deshpande A, Pasupuleti V, Rolston DD, et al. Diagnostic accuracy of real-time polymerase chain reaction in detection of Clostridium difficile in the stool samples of patients with suspected Clostridium difficile infection: a meta-analysis. Clin Infect Dis. 2011;53(7):e81-90. Epub 2011/09/06. 18. Kufelnicka AM, Kirn TJ. Effective utilization of evolving methods for the laboratory diagnosis of Clostridium difficile infection. Clin Infect Dis. 2011;52(12):1451-1457. Epub 2011/06/02. 19. Tenover FC, Baron EJ, Peterson LR, Pershing DH. Laboratory diagnosis of Clostridium difficile infection can molecular amplification methods move us out of uncertainty? J Mol Diagn. 2011;13(6):573-582. Epub 2011/08/23. 20. Peterson LR, Mehta MS, Patel PA, Hacek DM, Harazin M, Nagwekar PP, et al. Laboratory testing for Clostridium difficile infection: light at the end of the tunnel. Am J Clin Pathol. 2011;136(3):372380. 21. Kelly CP, LaMont JT. Clostridium difficile--more difficult than ever. N Engl J Med. 2008;359(18):1932-1940. 22. Monaghan T, Boswell T, Mahida YR. Recent advances in Clostridium difficile-associated disease. Gut. 2008;57(6):850-860. 23. Hardy K, Price C, Szczepura A, et al. Reduction in the rate of methicillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition in surgical wards by rapid screening for colonization: a prospective, cross-over study. Clin Microbiol Infect. 2010;16(4):333-339. Epub 2009/07/23. 24. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health. HHS Publication No. (CDC) 21-1112. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edition. Revised December 2009. 25. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections. Approved Guideline-Fourth Edition. CLSI Document M29A4:Wayne, PA;CLSI, 2014. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 39 cobas® Cdiff Test Wersja dokumentu Informacje dotycz ce wersji dokumentu Doc. Rev. 5.0 11/2016 Dodano zestaw do pobierania próbek z wymazówk pojedyncz Uni Swab Sample Kit (MN 07958030190). Dodano adres sieciowy firmy Roche www.roche.com. W razie jakichkolwiek pyta prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche. Doc. Rev. 4.0 08/2016 ® Zaktualizowano ostrze enia o zagro eniach dotycz ce zestawów cobas 4800 ® System Sample Preparation Kit oraz cobas 4800 System Lysis Kit 1. Poprawiono cz Materia y opcjonalne: Dodano „Roche P/N 07958056190; do ponownego zamykania przetworzonych próbek w okr odennych probówkach typu Roche 13 ml”. Pomini to Sarstedt 65.176.026. Zaktualizowano opisy na stronie z ujednoliconymi symbolami, znajduj cej si na ko cu ulotki do czonej do opakowania. W razie jakichkolwiek pyta prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche. 06979394001-05PL Doc. Rev. 5.0 40