Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Myogenin
Clone F5D
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR067
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Myogenin, klon F5D, Ready-to-Use, (Link), przeznaczone jest do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało znakuje białko miogeninę w
tkankach prawidłowych i nowotworowych, takich jak mięsak poprzecznie prążkowany i guz Wilmsa (1).
Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z
wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa
z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Gen miogeniny należy do rodziny genów miogenicznych, która obejmuje MyoD, myf5 i MRF4. W genach tych jest
zakodowany zestaw czynników transkrypyjnych koniecznych do rozwoju mięśni. Stwierdzono, że transfekcje
miogeniny w komórkach multipotencjalnych mezodermalnych przekształcają komórki mezodermalne w mioblasty
(2-4). Ekspresja miogeniny jest ograniczona do komórek pochodzących z mięśni szkieletowych (2). Białko
miogeniny istnieje w postaci dimeru lub tetrameru, lecz najczęściej występuje jako struktury wyższego rzędu (5).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z
zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości,
7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do użycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: F5D (6). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Peptyd miogeniny szczurzej (aa 73-94) z białkiem nośnikowym i peptydem fuzyjnym zawierającym miogeninę aa
30-224 (6).
Swoistość
Przeciwciało rozpoznaje epitop zlokalizowany w regionie aminokwasów 138-158 białka miogeniny; stwierdzono,
że znakuje miogeninę w ludzkich, mysich i szczurzych miotubach hodowanych oraz w próbkach tkanek
noworodków kocich, mysich i szczurzych (6).
Środki ostrożności
1.
2.
3.
4.
5.
Przechowywanie
(118286-001)
Do stosowania przez wyszkolony personel.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, należy stosować
właściwe procedury postępowania.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą należy nosić odpowiednie osobiste wyposażenie ochronne.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
307686PL_001 str. 1/3
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(10x), (Link) (nr kat. K8000/K8004).
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, które zostały odparafinowane, zalecany jest odczynnik Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101).
Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target
Retrieval Solution, High pH (10x), (Link) (nr kat. K8000/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować
następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu:
97°C przez 20 (±1) minut, ochłodzić do 65°C. Usunąć statywy na szkiełka aparatu Autostainer wraz ze szkiełkami
ze zbiornika aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat.
PT109) wypełnionym rozcieńczonym buforem EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (nr kat. K8000) o
temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1-5 minut.
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe
należy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer
Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania
szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli
protokoły nie są dostępne w używanym systemie Autostainer, należy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w temperaturze
pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez
patologów z różnym nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą
techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić
się, że działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki jak
opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy użyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować mięsaka
poprzecznie prążkowanego, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny
wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana
kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Przeciwciała dają reakcję jądrową, chociaż mogą również wystąpić ślady odczynu cytoplazmatycznego.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje jądra komórkowe mioblastów z kończyn płodu ludzkiego, jednak nie
odnotowano odczynu w tkankach mięśni szkieletowych osób dorosłych (1).
Tkanki patologiczne: Przeciwciało dało odczyn w przypadku większości poddanych rutynowym badaniom tkanek
mięsaków poprzecznie prążkowanych i guzów Wilmsa. Nie stwierdzono odczynu immunologicznego w
przypadku mięsaka Ewinga/pPNET i neuroblastomy. Ekspresja jądrowa miogeniny jest odwrotnie proporcjonalna
do stopnia zróżnicowania komórek nowotworowych mięsaka poprzecznie prążkowanego (1).
Piśmiennictwo
(118286-001)
1.
Wang NP, Marx J, McNutt MA, Rutledge JC, Gown AM. Expression of myogenic regulatory proteins
(myogenin and MyoD1) in small blue round cell tumors of childhood. Am J Pathol 1995; 147:1799-810.
2.
Wright WE, Sassoon DA, Lin VK. Myogenin, a factor regulating myogenesis, has a domain homologous to
MyoD. Cell 1989; 56:607-17.
3.
Auradé F, Pinset C, Chafey P, Gros F, Monterras D. Myf5, MyoD, myogenin and MRF4 myogenic
derivatives of the embryonic mesenchymal cell line C3H10T1/2 exhibit the same adult muscle phenotype.
Differentiation 1994; 55:185-92.
4.
Weintraub H, Davis R, Tapscott S, Thayer M, Krause M, Benezra R, et al. The myoD gene family: Nodal
point during specification of the muscle cell lineage. Science 1991; 251:761-6.
5.
Farmer K, Catala F, Wright WE. Alternative multimeric structures affect myogenin DNA binding activity. J
Biol Chem 1992; 267:5631-6.
6.
Wright WE, Dac-Korytko I, Farmer K. Monoclonal antimyogenin antibodies define epitopes outside the bHLH
domain where binding interferes with protein-protein and protein-DNA interaction. Dev Genet 1996; 19:1318.
307686PL_001 str. 2/3
Wydanie 04/08
(118286-001)
307686PL_001 str. 3/3