cobas Cdiff Test

Transkrypt

cobas Cdiff Test

cobas® Cdiff Test
do u ytku z systemem cobas® 4800
Do stosowania w diagnostyce in vitro
cobas® 4800 System Sample
Preparation Kit
240 Tests
960 Tests
P/N: 05235782190
P/N: 05235804190
cobas® 4800 System Lysis Kit 1
240 Tests
960 Tests
P/N: 06768253190
P/N: 06768270190
cobas® 4800 System Wash Buffer Kit
240 Tests
960 Tests
P/N: 05235863190
P/N: 05235871190
cobas® 4800 System Internal
Control Kit 1
20 Runs
P/N: 06768318190
cobas® 4800 Cdiff
Amplification/Detection Kit
80 Tests
240 Tests
P/N: 06768237190
P/N: 06768261190
cobas® 4800 Cdiff Controls
and Cofactor Kit
10 Runs
P/N: 06768300190
cobas® Cdiff Test
SPIS TRE CI
Zastosowanie
Podsumowanie i obja nienie testu/zasady procedury
Informacje podstawowe: badanie przesiewowe pod k tem bakterii C. difficile ................................... 4
Obja nienie testu ................................................................................................................................. 5
Zasady procedury ................................................................................................................................ 5
Przygotowanie próbek ................................................................................................................ 5
®
Amplifikacja w reakcji PCR i detekcja metod TaqMan ............................................................ 6
Amplifikacja wybiórcza ................................................................................................................ 6
Materia y, odczynniki i próbki
Dostarczane materia y i odczynniki...................................................................................................... 7
Przechowywanie i u ytkowanie odczynników .................................................................................... 13
Wymagane materia y dodatkowe ....................................................................................................... 14
Materia y opcjonalne .......................................................................................................................... 14
Urz dzenia i oprogramowanie wymagane, lecz niedostarczane ....................................................... 15
Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania
Ostrze enia i rodki ostro no ci ........................................................................................................ 15
Dobra praktyka laboratoryjna ............................................................................................................. 16
Zanieczyszczenie ............................................................................................................................... 16
Integralno
........................................................................................................................................ 16
Utylizacja ............................................................................................................................................ 17
Rozlanie p ynów i czyszczenie ........................................................................................................... 17
Pobieranie, transport i przechowywanie próbek ................................................................................ 17
Pobieranie próbek ..................................................................................................................... 17
Przechowywanie i trwa
próbek podczas transportu ........................................................... 17
Procedura testowa
Wykonywanie oznaczenia .................................................................................................................. 18
Przebieg pracy .......................................................................................................................... 18
Instrukcja u ytkowania .............................................................................................................. 18
Wyniki
Kontrola jako ci i wa no
wyników .................................................................................................. 23
Kontrola dodatnia ...................................................................................................................... 23
Kontrola ujemna ........................................................................................................................ 23
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
2
cobas® Cdiff Test
Kontrola wewn trzna ................................................................................................................ 23
Interpretacja wyników......................................................................................................................... 23
Ograniczenia metody ......................................................................................................................... 24
Ocena skuteczno ci w badaniach nieklinicznych
Czu
analityczna ........................................................................................................................... 26
Detekcja genotypów bakterii C. difficile ............................................................................................. 26
Precyzja .................................................................................................................................... 28
Swoisto
analityczna ............................................................................................................... 29
Substancje wp ywaj ce na wynik testu ..................................................................................... 31
Korelacja ................................................................................................................................... 33
Dodatkowe informacje ....................................................................................................................... 35
Najwa niejsze cechy oznaczenia ............................................................................................. 35
Oznaczenia ............................................................................................................................... 36
Producent i dystrybutorzy ......................................................................................................... 37
Znaki towarowe i patenty .......................................................................................................... 37
Copyright ................................................................................................................................... 37
Pi miennictwo ........................................................................................................................... 38
Wersja dokumentu .................................................................................................................... 40
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
3
cobas® Cdiff Test
Zastosowanie
Test cobas® Cdiff do stosowania z systemem cobas® 4800 to zautomatyzowany, jako ciowy test
diagnostyczny in vitro, wykorzystuj cy
cuchow reakcj polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym
do bezpo redniego wykrywania genu toksyny B (tcdB) szczepów toksynogennych Clostridium difficile
(C. difficile) w próbkach (p ynnych lub mi kkich) nieuformowanego stolca pozyskanych od pacjentów,
u których podejrzewa si zaka enie bakteriami C. difficile (CDI). Test cobas® Cdiff jest przeznaczony
do stosowania jako wsparcie podczas diagnozowania zaka
CDI u ludzi z uwzgl dnieniem
klinicznych i epidemiologicznych czynników ryzyka.
Podsumowanie i obja nienie testu/zasady procedury
Informacje podstawowe: badanie przesiewowe pod k tem bakterii C. difficile
C. difficile to Gram-dodatnie, beztlenowe, przetrwalnikuj ce laseczki, zidentyfikowane w pó nych
latach 70. jako czynnik etiologiczny rzekomob oniastego zapalenia jelit zwi zanego z antybiotykoterapi 1,2. Uwa a si , e odpowiadaj one za 15–20% przypadków biegunki wywo anej antybiotykoterapi oraz za praktycznie wszystkie przypadki rzekomob oniastego zapalenia jelit
zwi zanego z przyjmowaniem antybiotyków3. W ci gu ostatniej dekady obserwowano sta y wzrost
cz sto ci przypadków zaka
wywo ywanych przez bakterie C. difficile (CDI), które obecnie
stanowi istotny problem kliniczny w krajach rozwini tych. Podczas gdy wska niki zachorowalno ci
wynosi y 30–40 przypadków w 100 000 populacji szpitali specjalizuj cych si w leczeniu ostrych
przypadków na terenie Stanów Zjednoczonych, cz sto wyst powania wzros a do ponad
80 przypadków na 100 000 osób w 2005 r.4. Opisywano ju wyst powanie epidemii zaka
CDI5.
Bezpo redni koszt zwi zany z zaka eniami CDI wyniós 6326 USD na przypadek zachorowania na
terenie Stanów Zjednoczonych6.
Za rosn
cz sto wyst powania odpowiada cz ciowo pojawienie si rzekomo hiperwirulentnego
szczepu klasyfikowanego jako rybotyp 027/Ameryka Pó nocna, pulsotyp 1 (NAP1) i toksynotyp III.
Toksynogenne szczepy C. difficile zwykle wytwarzaj dwa rodzaje toksyn: toksyn A (enterotoksyn )
i toksyn B (cytotoksyn )7. Niewielki odsetek szczepów wytwarza wy cznie toksyn B8.
W ostatnich czasach opisywano rosn
wirulencj szczepów wytwarzaj cych inn toksyn ,
okre lan mianem toksyny binarnej, i obci onych delecj w genie negatywnego regulatora tcdC9,10.
Zg aszano, e te ostatnie szczepy cechuje wi ksza wirulencja in vitro i wy sza zachorowalno oraz
umieralno u ludzi11,12.
Po kolonizacji toksynogennym szczepem C. difficile pacjenci mog pozostawa bezobjawowymi
nosicielami lub zachorowa na chorob jelit. Cechy kliniczne zaka enia CDI mog przyjmowa
posta od agodnej biegunki do zagra aj cego yciu rzekomob oniastego zapalenia jelit, któremu
towarzyszy ból brzucha, silna biegunka i objawy ogólnoustrojowe, takie jak gor czka, jad owstr t,
nudno ci i z e samopoczucie.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
4
cobas® Cdiff Test
Rozpoznanie zaka enia CDI zwykle opiera si na wykazaniu obecno ci toksyny A i/lub B w próbkach
stolca. Wykazanie wyst powania efektu cytopatycznego w monowarstwie komórek wynikaj cego
z dzia ania toksyny B jest uznawane przez wiele osób za „z oty standard”13, 14. Wykazanie efektu
cytopatycznego mo na osi gn przez bezpo redni inkubacj supernatantu stolca z monowarstw
komórek. Mo na równie prowadzi hodowl izolatów C. difficile w bulionie selektywnym, a uzyskany
supernatant wykorzysta do inkubacji z monowarstw komórek (hodowla toksynogenna)15.
W przypadku obu technik ko cowy wynik uzyskuje si po co najmniej 48–72 godzinach. Oznaczenia
immunologiczne s powszechnie stosowane do detekcji toksyny A oraz B, poniewa umo liwiaj
uzyskanie dodatniego wyniku w czasie krótszym ni 4 godziny. Jednak ich czu
jest znacz co
ni sza w porównaniu z hodowl tkankow 16. W porównaniu z klinicznymi kryteriami potwierdzaj cymi
wyst pienie zaka enia CDI reakcj PCR cechuje czu
, swoisto oraz warto ci predykcyjne
wyników dodatnich i ujemnych wynosz ce odpowiednio 93,3%, 97,4%, 75,5% oraz 99,4% z czasem
oczekiwania <4 godzin15. Reakcja PCR jest uznawana za optymalny, szybki, pojedynczy test do
wykrywania toksyny produkowanej przez bakterie C. difficile17-20. Mimo dramatycznego wzrostu
cz sto ci zachorowa i nasilenia zaka
CDI metronidazol lub wankomycyna pozostaj leczeniem
farmakologicznym z wyboru w przypadku epizodów ostrych i zaka
nawracaj cych21.
Do metod kontroli zaka
nale y rozwa ne stosowanie antybiotykoterapii, zapobieganie zaka eniom
krzy owym oraz aktywny nadzór nad przypadkami zachorowa 22. Nie zaleca si powtarzania testu
w celu potwierdzenia wyleczenia, poniewa toksyny mog by obecne w organizmie przez d szy
czas bez dawania objawów klinicznych.
Z tego powodu istnieje wielka potrzeba wysoce czu ej i szybkiej, zautomatyzowanej metody detekcji
bakterii C. difficile. Metody molekularne oferuj potencja istotnego skrócenia czasu wykrywania,
umo liwiaj c przez to szybkie rozpocz cie leczenia przeciwbakteryjnego oraz wczesne wdro enie
17-20
metod kontroli zaka
.
Obja nienie testu
Test cobas® Cdiff obejmuje dwa g ówne procesy: (1) zautomatyzowane przygotowanie próbek w celu
izolacji kwasów nukleinowych z próbek nieuformowanego stolca; (2) amplifikacj docelowych
sekwencji DNA w reakcji PCR z wykorzystaniem swoistych dla szczepów C. difficile primerów,
a tak e detekcj w czasie rzeczywistym wyznakowanych fluorescencyjnie, rozszczepionych
detekcyjnych sond oligonukleotydowych swoistych dla bakterii C. difficile. Przed rozpocz ciem
zautomatyzowanego procesu przygotowania do wszystkich próbek dodawana jest kontrola
wewn trzna, zawieraj ca niepowi zan , losow sekwencj DNA, poddawana amplifikacji i detekcji
jednocze nie z ka
próbk w celu umo liwienia kontroli ca ego procesu.
Zasady procedury
Przygotowanie próbek
Przygotowanie próbek do testu cobas® Cdiff jest zautomatyzowane za pomoc aparatu cobas x 480.
Mikroorganizmy s poddawane lizie z u yciem czynnika chaotropowego, proteinazy K oraz
odczynnika SDS. Uwolnione kwasy nukleinowe, wraz z dodanym DNA stanowi cym kontrol
wewn trzn , s wi zane z cz steczkami magnetycznymi. S one przep ukiwane, a nast pnie
poddawane elucji w ma ej obj to ci buforu. Nast pnie aparat pobiera porcj materia u poddanego
elucji i przygotowuje reakcj PCR z u yciem aktywowanego odczynnika Master Mix.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
5
cobas® Cdiff Test
Amplifikacja w reakcji PCR i detekcja metod TaqMan®
Etapy cykli reakcji PCR oraz detekcja docelowego sygna u zachodz w analizatorze cobas z 480.
Odczynnik Master Mix zawiera pary primerów i sondy swoiste dla dwóch elementów docelowych:
toksyny B oraz kontroli wewn trznej. Je li docelowe sekwencje kwasu nukleinowego s obecne,
dojdzie do amplifikacji z u yciem odpowiednich primerów oraz termostabilnej polimerazy DNA, co
dzie skutkowa o utworzeniem produktów reakcji PCR (amplikonu). Te produkty s wykrywane
przez swoiste sondy TaqMan zawieraj ce barwnik fluorescencyjny oraz wygaszacz. W stanie
wyj ciowym wygaszacz t umi fluorescencj barwnika. Jednak w przypadku obecno ci produktu PCR
sonda z nim hybrydyzuje i ulega rozszczepieniu na skutek dzia ania polimerazy, która wykazuje
aktywno nukleazy w kierunku od ko ca 5' do ko ca 3'. Ta reakcja umo liwia emisj fluorescencji
z barwnika, a sygna jest rejestrowany w czasie rzeczywistym w trakcie ka dego cyklu reakcji PCR
przez analizator cobas z 480. Sygna jest interpretowany przez oprogramowanie systemu
cobas® 4800 i przedstawiany w postaci ko cowych wyników.
Amplifikacja wybiórcza
Amplifikacj wybiórcz badanego kwasu nukleinowego z próbki klinicznej przy u yciu testu cobas®
Cdiff uzyskuje si dzi ki zastosowaniu enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylazy) i trójfosforanu
dezoksyurydyny (dUTP). Enzym AmpErase rozpoznaje i katalizuje niszczenie nici DNA
zawieraj cych dezoksyurydyn 23, lecz nie DNA zawieraj cego dezoksytymidyn . Dezoksyurydyny
nie stwierdza si w wyst puj cym naturalnie DNA, natomiast jest ona zawsze obecna w amplikonie
z uwagi na stosowanie trójfosforanu dezoksyurydyny zamiast trójfosforanu tymidyny jako jednego
spo ród dNTPs w odczynniku Master Mix; dlatego te jedynie amplikon zawiera dezoksyurydyn .
Dezoksyurydyna powoduje wra liwo zanieczyszczaj cego amplikonu na rozk ad przez enzym
AmpErase przed amplifikacj docelowego DNA. Zawarty w odczynniku Master Mix enzym AmpErase
katalizuje rozszczepienie DNA zawieraj cego dezoksyurydyn w miejscu reszt dezoksyurydynowych
przez otwarcie pier cienia dezoksyrybozy w pozycji C1. Podczas ogrzewania w pierwszym cyklu
termicznym w pH zasadowym odczynnika Master Mix
cuch amplikonu DNA p ka w pozycji
dezoksyurydyny, w ten sposób wykluczaj c dalsz amplifikacj DNA. Enzym AmpErase jest
nieczynny w temperaturach powy ej 55°C, tj. w czasie trwania ca ego cyklu termicznego, dlatego
te nie niszczy on amplikonu docelowego. Wykazano, e test cobas® Cdiff dezaktywuje na ka
reakcj PCR co najmniej 1000 kopii zawieraj cego dezoksyurydyn amplikonu C. difficile.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
6
cobas® Cdiff Test
Materia y, odczynniki i próbki
Dostarczane materia y i odczynniki
Zestaw/kasety
Elementy i sk adniki odczynników
Ilo
na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie
MGP
®
cobas 4800 System
Sample Preparation Kit
(Zestaw do
przygotowywania próbek
w systemie
®
cobas 4800)
(Szklane cz stki o w ciwo ciach
®
magnetycznych systemu cobas 4800)
Szklane cz stki o w
magnetycznych
ciwo ciach
10 x 4,5 ml
93% izopropanolu
240 testów
(P/N: 05235782190)
Niebezpiecze stwo
H225 Wysoce atwopalna ciecz i pary.
H319 Dzia a dra ni co na oczy.
H336 Mo e wywo ywa uczucie senno ci
lub zawroty g owy.
P210 Przechowywa z dala od róde
ciep a, gor cych powierzchni, róde
iskrzenia, otwartego ognia i innych róde
zap onu. Nie pali .
P233 Przechowywa pojemnik szczelnie
zamkni ty.
P261 Unika wdychania py u/dymu/gazu/
mg y/par/rozpylonej cieczy.
P280 Stosowa r kawice ochronne/
ochron oczu/ochron twarzy.
P303 + P361 + P353 W PRZYPADKU
KONTAKTU ZE SKÓR (lub z w osami):
Natychmiast zdj ca zanieczyszczon
odzie . Sp uka skór pod strumieniem
wody/prysznicem.
P370 + P378 W przypadku po aru: U
suchego piasku, proszku chemicznego
lub rodka pianotwórczego odpornego na
dzia anie alkoholi do gaszenia.
Nie dotyczy
EB
®
(Bufor do elucji systemu cobas 4800)
Bufor Tris-HCl
10 x 18 ml
0,09% azydku sodu
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
7
cobas® Cdiff Test
Zestaw/kasety
Ilo
MGP
®
cobas 4800 System
Sample Preparation Kit
(Zestaw do
przygotowywania próbek
w systemie
®
cobas 4800)
(Szklane cz stki o w ciwo ciach
®
magnetycznych systemu cobas 4800)
Szklane cz stki o w
magnetycznych
ciwo ciach
10 x 13,5 ml
93% izopropanolu
960 testów
(P/N: 05235804190)
Niebezpiecze stwo
H225 Wysoce atwopalna ciecz i pary.
H319 Dzia a dra ni co na oczy.
H336 Mo e wywo ywa uczucie senno ci
lub zawroty g owy.
P210 Przechowywa z dala od róde
ciep a, gor cych powierzchni, róde
iskrzenia, otwartego ognia i innych róde
zap onu. Nie pali .
P233 Przechowywa pojemnik szczelnie
zamkni ty.
KONTAKTU ZE SKÓR (lub z w osami):
Natychmiast zdj ca zanieczyszczon
odzie . Sp uka skór pod strumieniem
wody/prysznicem.
P370 + P378 W przypadku po aru: U
suchego piasku, proszku chemicznego
lub rodka pianotwórczego odpornego na
dzia anie alkoholi do gaszenia.
Nie dotyczy
EB
®
(Bufor do elucji systemu cobas 4800)
Bufor Tris-HCl
10 x 18 ml
0,09% azydku sodu
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
8
cobas® Cdiff Test
Zestaw/kasety
Ilo
LYS-1
(Bufor do lizy 1 w systemie
®
cobas 4800)
Cytrynian sodu
5% polidokanol
42,6% tiocyjanianu guanidyny
Ditiotreitol
Niebezpiecze stwo
H302 + H332 Dzia a szkodliwie po
10 x 24 testy po kni ciu i w nast pstwie wdychania.
H317 Mo e powodowa reakcj
alergiczn skóry.
H318 Powoduje powa ne uszkodzenie
oczu.
H334 Mo e powodowa objawy alergii
lub astmy lub trudno ci w oddychaniu
w nast pstwie wdychania.
H412 Dzia a szkodliwie na organizmy
wodne, powoduj c d ugotrwa e skutki.
PK
EUH032 W kontakcie z kwasami uwalnia
®
(Proteinaza K systemu cobas 4800)
bardzo toksyczne gazy.
Bufor Tris
EDTA
®
cobas 4800 System
10 x 0,9 ml
Chlorek wapnia
Lysis Kit 1
Octan wapnia
(Zestaw do lizy 1
P284 Stosowa indywidualne rodki
®
w systemie cobas 4800) < 2,0% proteinazy K
ochrony dróg oddechowych.
Gliceryna
240 testów
DOSTANIA SI DO DRÓG
(P/N: 06768253190)
ODDECHOWYCH: Wyprowadzi lub
wynie poszkodowanego na wie e
powietrze i zapewni mu warunki do
swobodnego oddychania. W przypadku
ego samopoczucia skontaktowa si
z O RODKIEM ZATRU lub z lekarzem.
P305 + P351 + P338 + P310
W PRZYPADKU DOSTANIA SI DO
OCZU: Ostro nie p uka wod przez
SDS
kilka minut. Wyj soczewki kontaktowe,
®
(Odczynnik SDS systemu cobas 4800)
je eli s i mo na je atwo usun . Nadal
Bufor Tris-HCl
10 x 3 ml
uka . Natychmiast skontaktowa si
Dodecylosiarczanu sodu
z O RODKIEM ZATRU /lekarzem.
0,09% azydku sodu
P342 + P311 W przypadku wyst pienia
objawów ze strony uk adu oddechowego:
Skontaktowa si z O RODKIEM
ZATRU /lekarzem.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
9
cobas® Cdiff Test
Zestaw/kasety
Ilo
Niebezpiecze stwo
H302 + H332 Dzia a szkodliwie po
LYS-1
po kni ciu i w nast pstwie wdychania.
(Bufor do lizy 1 w systemie
H317
Mo e powodowa reakcj
®
cobas 4800)
alergiczn skóry.
Cytrynian sodu
10 x 96 testów H318 Powoduje powa ne uszkodzenie
oczu.
5% polidokanol
H334 Mo e powodowa objawy alergii
42,6% tiocyjanianu guanidyny
lub astmy lub trudno ci w oddychaniu
Ditiotreitol
w nast pstwie wdychania.
H412 Dzia a szkodliwie na organizmy
wodne, powoduj c d ugotrwa e skutki.
EUH032 W kontakcie z kwasami uwalnia
bardzo toksyczne gazy.
®
cobas 4800 System
PK
Lysis Kit 1
®
(Proteinaza K systemu cobas 4800)
(Zestaw do lizy 1
P284 Stosowa indywidualne rodki
®
w systemie cobas 4800) Bufor Tris
ochrony dróg oddechowych.
EDTA
960 testów
20 × 1,2 ml
Chlorek wapnia
DOSTANIA SI DO DRÓG
(P/N: 06768270190)
ODDECHOWYCH: Wyprowadzi lub
Octan wapnia
wynie poszkodowanego na wie e
< 2,0% proteinazy K
powietrze i zapewni mu warunki do
swobodnego oddychania. W przypadku
Gliceryna
ego samopoczucia skontaktowa si
z O RODKIEM ZATRU lub z lekarzem.
P305 + P351 + P338 + P310
W PRZYPADKU DOSTANIA SI DO
OCZU: Ostro nie p uka wod przez
kilka minut. Wyj soczewki kontaktowe,
SDS
je eli s i mo na je atwo usun . Nadal
®
uka . Natychmiast skontaktowa si
(Odczynnik SDS systemu cobas 4800)
z O RODKIEM ZATRU /lekarzem.
Bufor Tris-HCl
10 × 9 ml
P342 + P311 W przypadku wyst pienia
Dodecylosiarczanu sodu
objawów ze strony uk adu oddechowego:
Skontaktowa si z O RODKIEM
0,09% azydku sodu
ZATRU /lekarzem.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
10
cobas® Cdiff Test
Zestaw/kasety
Ilo
®
cobas 4800 System
Wash Buffer Kit
(Zestaw buforu
ucz cego do systemu
®
cobas 4800)
240 testów
(P/N: 05235863190)
Nie dotyczy
WB
®
(Bufor p ucz cy systemu cobas 4800)
Cytrynian sodu dwuwodny
10 x 55 ml
0,05% N-metyloizotiazolonu HCl
®
cobas 4800 System
Wash Buffer Kit
(Zestaw buforu
ucz cego do systemu
®
cobas 4800)
960 testów
(P/N: 05235871190)
Nie dotyczy
WB
®
(Bufor p ucz cy systemu cobas 4800)
Cytrynian sodu dwuwodny
10 x 200 ml
0,05% N-metyloizotiazolonu HCl
IC-1
®
cobas 4800 System
Internal Control Kit 1
(Zestaw kontroli
wewn trznej 1 systemu
®
cobas 4800)
20 przebiegów
(P/N: 06768318190)
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
Nie dotyczy
(Kontrola wewn trzna 1 systemu
®
cobas 4800)
Bufor Tris
EDTA
< 0,01% poli-rA RNA (syntetycznego)
20 przebiegów
0,05% azydku sodu
< 0,01% niezaka nego, syntetycznego
DNA do kontroli wewn trznej,
op aszczonego bia kiem kapsydowym
bakteriofaga lambda
11
cobas® Cdiff Test
Zestaw/kasety
Ilo
Nie dotyczy
Cdiff MMX
®
(Odczynnik Master Mix cobas Cdiff)
Bufor trycynowy
EDTA
DMSO
Octan potasu
®
cobas 4800 Cdiff
Amplification/Detection
Kit
(Zestaw do amplifikacji/
®
detekcji systemu cobas
4800 Cdiff)
80 testów
(P/N: 06768237190)
Wodorotlenek potasu
Tween 20
< 0,19% dATP, dCTP, dGTP, dUTP
< 0,01% roztworu starterów
sensownych i antysensownych dla
C. difficile oraz kontroli wewn trznej
10 x 8 testów
< 0,01% roztworu znakowanych
barwnikiem fluorescencyjnym sond dla
< 0,01% aptameru oligonukleotydowego
< 0,01% polimerazy DNA Z05
(bakteryjnej)
< 0,02% enzymu AmpErase
(uracylo-N-glikozylazy) (bakteryjnej)
0,09% azydku sodu
Cdiff MMX
Nie dotyczy
®
(Odczynnik Master Mix cobas Cdiff)
Bufor trycynowy
EDTA
DMSO
Octan potasu
®
cobas 4800 Cdiff
Amplification/Detection
Kit
(Zestaw do amplifikacji/
®
detekcji systemu cobas
4800 Cdiff)
240 testów
(P/N: 06768261190)
Wodorotlenek potasu
Tween 20
< 0,19% dATP, dCTP, dGTP, dUTP
< 0,01% roztworu starterów
sensownych i antysensownych dla
10 x 24 testy
< 0,01% roztworu znakowanych
barwnikiem fluorescencyjnym sond dla
< 0,01% aptameru oligonukleotydowego
< 0,01% polimerazy DNA Z05
(bakteryjnej)
< 0,02% enzymu AmpErase
(uracylo-N-glikozylazy) (bakteryjnej)
0,09% azydku sodu
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
12
cobas® Cdiff Test
Zestaw/kasety
Ilo
Nie dotyczy
Cdiff (+) C
®
(Kontrola dodatnia cobas Cdiff)
Bufor Tris
EDTA
10 zestawów
0,05% azydku sodu
< 0,01% niezaka nego plazmidu DNA
(bakteryjnego) zawieraj cego
sekwencj C. difficile
®
cobas 4800 Cdiff
Controls and Cofactor Kit
(Zestaw kontroli i
kofaktora Cdiff systemu
®
cobas 4800)
10 przebiegów
(P/N: 06768300190)
(–) C
Nie dotyczy
(Kontrola ujemna systemu
®
cobas 4800)
Bufor Tris
10 zestawów
EDTA
0,05% azydku sodu
Cofactor-3
Nie dotyczy
®
(Kofaktor-3 systemu cobas 4800)
Octan manganu
Octan magnezu
Albumina surowicy bydl cej z osocza
bydl cego, pozyskana w Stanach
Zjednoczonych
10 przebiegów
0,09% azydku sodu
Przechowywanie i u ytkowanie odczynników
Odczynnik
Temperatura
przechowywania
®
cobas 4800 System Sample Preparation Kit
®
(Zestaw do przygotowywania próbek w systemie cobas 4800)
2–8°C
Zachowuje trwa
do momentu up ywu
wskazanej daty wa no ci.
2–8°C
Zachowuje trwa
do momentu up ywu
2–8°C
Zachowuje trwa
do momentu up ywu
2–8°C
Zachowuje trwa
do momentu up ywu
2–8°C
Zachowuje trwa
do momentu up ywu
15–25°C
Zachowuje trwa
do momentu up ywu
®
cobas 4800 System Lysis Kit 1
®
(Zestaw do lizy 1 w systemie cobas 4800)
®
cobas 4800 System Internal Control Kit 1
®
(Zestaw kontroli wewn trznej 1 systemu cobas 4800)
®
cobas 4800 Cdiff Amplification/Detection Kit
®
(Zestaw do amplifikacji/detekcji systemu cobas 4800 Cdiff)
®
cobas 4800 Cdiff Controls and Cofactor Kit
®
(Zestaw kontroli i kofaktora Cdiff systemu cobas 4800)
®
cobas 4800 System Wash Buffer Kit
®
(Zestaw buforu p ucz cego do systemu cobas 4800)
Czas przechowywania
Uwaga: Nie nale y zamra
odczynników.
Dat wa no ci odczynników okre lono w oparciu o skoordynowany czas uniwersalny (UTC). Lokalny czas wa no ci odczynników
mo na okre li , dodaj c lub odejmuj c maksymalnie 12 godzin w zale no ci od czasu miejscowego w odniesieniu do czasu UTC.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
13
cobas® Cdiff Test
Wymagane materia y dodatkowe
Materia y
P/N
Ko cówki CORE, 1000 µl, statyw zawieraj cy 96 sztuk
04639642001
Pojemnik na odczynnik 50 ml
05232732001
Pojemnik na odczynnik 200 ml
05232759001
ytka (g bokodo kowa) do ekstrakcji w systemie
®
cobas 4800
05232716001
ytka AD 0,3 ml (z mikrodo kami) i folia uszczelniaj ca
®
systemu cobas 4800
05232724001
Aplikator folii uszczelniaj cej
04900383001
No nik 24-pozycyjny
04639502001
Worek na odpady sta e
05530873001 (ma y) lub 04691989001 (du y)
Plastikowa zsuwnia Hamilton STAR
04639669001
®
cobas PCR Media and Swab Sample Kit
(Zestaw do pobierania próbek zawieraj cy pod
®
cobas PCR i wymazówk )
e
kawice jednorazowe bezpudrowe
07051891190
Akceptowalne s jakiekolwiek bezpudrowe r kawice
jednorazowe.
Mieszad o wibracyjne (do mieszania jednej probówki)
Akceptowalne jest dowolne mieszad o wibracyjne.
Wirówka laboratoryjna, wyposa ona w b ben wirówki o
minimalnej warto ci RCF równej 1500
Akceptowalna jest dowolna wirówka spe niaj ca te
wymagania.
W celu uzyskania dodatkowych informacji dotycz cych materia ów sprzedawanych oddzielnie prosimy o kontakt
z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche.
Materia y opcjonalne
Materia y
P/N
Maty zamykaj ce lub pokrywa p ytki g bokodo kowej
Roche 04789288001 lub Hamilton 6474-01
Korki, bezbarwne (do ponownego zamykania
przetworzonych próbek pierwotnych)
Roche P/N 07958056190; do ponownego zamykania
przetworzonych próbek w okr odennych probówkach
13 ml
W celu uzyskania dodatkowych informacji dotycz cych materia ów opcjonalnych prosimy o kontakt z miejscowym
przedstawicielstwem firmy Roche.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
14
cobas® Cdiff Test
Urz dzenia i oprogramowanie wymagane, lecz niedostarczane
Wymagane urz dzenia i oprogramowanie, lecz niedostarczane
®
System cobas 4800
Aparat cobas x 480
Analizator cobas z 480
Jednostka steruj ca
®
®
Oprogramowanie cobas Cdiff AP systemu cobas 4800 w wersji 1.0.1 lub nowsze
®
Oprogramowanie aplikacyjne (podstawowe) systemu cobas 4800 w wersji 2.1.0 lub nowsze
W celu uzyskania dodatkowych informacji dotycz cych materia ów sprzedawanych oddzielnie
prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche.
Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania
Ostrze enia i rodki ostro no ci
Podobnie jak w przypadku ka dej procedury testowej, dla prawid owego przeprowadzenia badania
kluczowe znaczenie ma zachowanie zasad dobrej praktyki laboratoryjnej. Z uwagi na wysok czu
analityczn niniejszego testu nale y przedsi wzi wyj tkow ostro no , u ywaj c odczynników,
próbek oraz mieszanin do amplifikacji, aby zapobiec zanieczyszczeniu.
Do stosowania wy cznie w diagnostyce in vitro.
Nale y unika mikrobiologicznego i przez DNA zanieczyszczenia odczynników i próbek.
Karty charakterystyki (Safety Data Sheet, SDS) s dost pne na danie w miejscowym
przedstawicielstwie firmy Roche.
Odczynnik LYS-1 zawiera tiocyjanian guanidyny. Nie dopu ci do bezpo redniego kontaktu
mi dzy tiocyjanianem guanidyny i podchlorynem sodu (wybielacz) ani innymi wysoce
reaktywnymi odczynnikami, takimi jak kwasy lub zasady. Takie mieszaniny mog wydziela
truj ce gazy.
Odczynnik MGP zawiera izopropanol i jest wysoce atwopalny. Nale y przechowywa go
z dala od otwartego ognia i potencjalnych róde iskier.
Nie wolno nara
odczynnika MGP na dzia anie róde pola magnetycznego.
Odczynniki EB, Cdiff MMX, SDS, Cofactor-3, (–)C, Cdiff (+)C oraz IC-1 zawieraj azydek sodu.
Dodatkowe ostrze enia, rodki ostro no ci oraz procedury maj ce na celu zredukowanie
ryzyka zaka enia, dotycz ce aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 mo na znale
w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800. W przypadku podejrzenia
wyst pienia zanieczyszczenia nale y przeprowadzi czyszczenie oraz konserwacj
tygodniow zgodnie z opisem zamieszczonym w odpowiednim Podr czniku systemu —
system cobas® 4800.
Uwaga: Szczegó owe instrukcje zamieszczono w cz ci „Pobieranie, transport i
przechowywanie próbek”.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
15
cobas® Cdiff Test
Dobra praktyka laboratoryjna
Nie nale y pipetowa za pomoc ust.
Nie wolno je , pi ani pali w obszarach roboczych laboratorium.
Po zako czeniu pracy z próbkami i odczynnikami testowymi nale y dok adnie umy r ce.
Podczas pracy z jakimikolwiek odczynnikami nale y u ywa os on na oczy oraz fartuchów
laboratoryjnych i r kawic jednorazowych. Nale y unika kontaktu wymienionych materia ów
ze skór , oczami i b onami luzowymi. Je eli dojdzie do kontaktu, miejsce jego wyst pienia
nale y natychmiast sp uka du ilo ci wody. Je eli nie zostan podj te odpowiednie
dzia ania lecznicze, mo e doj do oparze . W razie rozlania przed wytarciem nale y
rozcie czy wod .
Dok adnie oczy ci i odkazi wszystkie laboratoryjne powierzchnie robocze wie o
przygotowanym roztworem 0,5% podchlorynu sodu w wodzie destylowanej lub dejonizowanej
(rozcie czy domowy wybielacz w stosunku 1:10). Nast pnie nale y przetrze powierzchni
70% etanolem.
Zanieczyszczenie
W celu zapobie enia zanieczyszczeniu konieczne jest noszenie r kawic i ich zmiana pomi dzy
prac z próbkami i odczynnikami testu cobas® Cdiff. Podczas pracy z próbkami i kontrolami
nale y unika zanieczyszczenia r kawic. Podczas obchodzenia si z próbkami i zestawem
odczynników nale y nosi jednorazowe r kawice, fartuchy laboratoryjne oraz os on oczu.
Nale y unika mikrobiologicznego i przez rybonukleazy zanieczyszczenia odczynników.
Je eli w trakcie obchodzenia si z próbkami i ich przetwarzania nie jest mo liwa odpowiednia
kontrola przeniesienia mi dzy próbkami, mo e doj do wyst pienia wyników fa szywie
dodatnich.
Z próbkami nale y obchodzi si tak jak z materia em zaka nym, stosuj c laboratoryjne
procedury bezpiecze stwa, takie jak okre lone w dokumentach: Biosafety in Microbiological
and Biomedical Laboratories24 oraz CLSI Document M29-A425.
Integralno
Nie wolno u ywa zestawów po up ywie daty wa no ci.
Nie nale y poddawa odczynników pulowaniu.
Nie wolno u ywa przedmiotów jednorazowego u ytku po up ywie daty wa no ci.
Wszystkie przedmioty jednorazowego u ytku s przeznaczone do jednokrotnego u ycia.
Nie wykorzystywa ponownie.
Ca e wyposa enie powinno by odpowiednio konserwowane, zgodnie z instrukcjami
producenta.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
16
cobas® Cdiff Test
Utylizacja
Odczynniki systemu cobas® 4800 oraz odczynniki swoiste dla testu cobas® Cdiff zawieraj
azydek sodu (patrz rozdzia „Ostrze enia i rodki ostro no ci”). Azydek sodu mo e reagowa
z instalacjami wodno-kanalizacyjnymi wykonanymi z o owiu lub miedzi, tworz c silnie
wybuchowe azydki metali. Usuwaj c roztwory zawieraj ce azydek sodu do zlewów
laboratoryjnych, nale y przep uka rury du ilo ci zimnej wody, aby zapobiec nagromadzeniu
azydków.
Nale y wyrzuci wszystkie nieu yte odczynniki, post puj c zgodnie z przepisami krajowymi,
federalnymi, stanowymi i lokalnymi.
Uwaga: Informacje dotycz ce usuwania odpadów p ynnych zamieszczono w odpowiednim
Podr czniku systemu — system cobas® 4800.
Rozlanie p ynów i czyszczenie
Odczynnik LYS-1 zawiera tiocyjanian guanidyny. Je li p yn zawieraj cy tiocyjanian guanidyny
ulegnie rozlaniu, do czyszczenia nale y u ywa odpowiedniego detergentu laboratoryjnego
i wody. Je li rozlany p yn zawiera potencjalne czynniki zaka ne, do czyszczenia nale y
NAJPIERW u ywa detergentu laboratoryjnego i wody, a nast pnie 0,5% roztworu
podchlorynu sodu.
Je li do rozlania p ynu dojdzie na powierzchni aparatu cobas® 4800, nale y post powa
zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku systemu — system
cobas® 4800 w celu przeprowadzenia czyszczenia.
Do czyszczenia aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 nie wolno u ywa roztworu
podchlorynu sodu (wybielacz). Czyszczenia aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480
nale y dokonywa zgodnie z procedurami opisanymi w odpowiednim Podr czniku systemu —
system cobas® 4800.
Pobieranie, transport i przechowywanie próbek
Uwaga: Ze wszystkimi próbkami nale y obchodzi si jak z materia em potencjalnie zaka nym.
Pobieranie próbek
Próbk nieuformowanego stolca nale y pobra do ja owego pojemnika. Próbki nale y pobiera
zgodnie z procedur okre lon w standardowych procedurach roboczych placówki.
Przechowywanie i trwa
próbek podczas transportu
Próbki nieuformowanego stolca zachowuj trwa
w temperaturze 2–30°C przez 2 dni lub
w temperaturze 2–8°C przez 7 dni b
–20°C przez 60 dni przed przeprowadzeniem oznaczenia
w systemie cobas® 4800 (wykazano to przez oznaczanie próbek po przechowywaniu kolejno w temp.
30°C ±1°C przez 2 dni, w temp. 2–8°C przez 5 dni, a nast pnie w temp. –20°C przez 60 dni).
Próbki stolca wymieszane z pod em PCR cobas® zachowuj trwa
w temperaturze 2–8°C przez
60 dni lub w temperaturze 30°C przez 7 dni przed wykonaniem oznaczenia w systemie cobas® 4800.
Próbki bakterii C. difficile musz by transportowane zgodnie z przepisami krajowymi, federalnymi,
stanowymi i lokalnymi dotycz cymi transportu czynników etiologicznych.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
17
cobas® Cdiff Test
Procedura testowa
Wykonywanie oznaczenia
Przebieg pracy
®
Rysunek 1:
Przebieg pracy z u yciem testu cobas Cdiff
1
Uruchomienie systemu.
2
Wykonanie czynno ci konserwacyjnych w odniesieniu do aparatu.
3
Wyj cie próbek i odczynników z miejsca przechowywania.
4
Rozpocz cie przebiegu:
Umieszczenie no ników z próbkami.
5
W przypadku korzystania z systemu LIS: potwierdzenie zlecenia pracy.
W przypadku braku systemu LIS: utworzenie zlecenia pracy.
6
Umieszczenie materia ów eksploatacyjnych (p ytki g bokodo kowej, p ytki
mikrodo kowej, statywów na ko cówki) i odczynników.
7
Rozpocz cie przebiegu przygotowania próbek.
8
Wyj cie i uszczelnienie p ytki mikrodo kowej.
9
Wyj cie próbek, zu ytych odczynników i p ytki g bokodo kowej.
10
Umieszczenie p ytki mikrodo kowej w analizatorze.
11
Przeanalizowanie wyników.
12
W przypadku korzystania z systemu LIS: przes anie wyników do systemu LIS.
13
Wyj cie p ytki z analizatora.
Instrukcja u ytkowania
Wszystkie odczynniki, poza odczynnikami Cdiff MMX i Cofactor-3, przed za adowaniem do aparatu
cobas x 480 musz znajdowa si w temperaturze pokojowej. Odczynniki Cdiff MMX i Cofactor-3
mo na umieszcza w aparacie bezpo rednio z temperatury przechowywania 2–8°C, poniewa ich
temperatura zostanie wyrównana do temperatury otoczenia wewn trz aparatu cobas x 480 podczas
procesu przetwarzania.
Uwaga: Szczegó owe instrukcje obs ugi mo na znale w odpowiednim Podr czniku
ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
18
cobas® Cdiff Test
Wielko
przebiegu
W systemie cobas® 4800 mo na prowadzi jednocze nie testy cobas® MRSA/SA, cobas® Cdiff oraz
cobas® HSV 1 i 2 w ramach po czenia ró nych partii w tym samym przebiegu. Ogólny zestaw do
przygotowywania próbek w systemie cobas® 4800, ogólny zestaw do lizy 1 w systemie cobas® 4800
oraz ogólny zestaw buforu p ucz cego do systemu cobas® 4800 s dost pne w dwóch wielko ciach,
z których ka da wystarcza na 10 przebiegów zawieraj cych do 24 lub 96 próbek w czaj c kontrole
i próbki dla wszystkich oznacze do przeprowadzenia. Zestaw do amplifikacji/detekcji Cdiff w systemie
cobas® 4800 jest dost pny w dwóch wielko ciach, z których ka da wystarcza do przeprowadzenia
analizy maksymalnie 80 lub 240 próbek obejmuj cych kontrole Cdiff oraz próbki do oznaczenia.
Zale nie od potrzeb w jednym przebiegu mo na wykorzysta kilka fiolek odczynnika cobas® 4800 Cdiff
Master Mix pod warunkiem, e pochodz one z zestawów o tym samym rozmiarze. Ogólny zestaw
kontroli wewn trznej 1 systemu cobas® 4800 oraz zestaw kontroli i kofaktora Cdiff systemu
cobas® 4800 s dost pne w zestawie o jednym rozmiarze, który mo e zosta wykorzystany we
wszystkich konfiguracjach przebiegu. Na ka dy przebieg zawieraj cy próbki C. difficile nale y u
jedn dodatni kontrol Cdiff systemu cobas® 4800 i jedn kontrol ujemn systemu cobas® 4800
(patrz rozdzia „Kontrola jako ci”). W przypadku przebiegu z jednym testem maksymalna
dopuszczalna liczba próbek to 94 próbki pacjentów i 2 kontrole.
Uwaga: Chocia nie stanowi to optymalnego u ycia odczynników, w przebiegu zawieraj cym
cznie 1–22 próbek mo na u
odczynnika ogólnego zestawu 96 testów. Jednak nie
mo na czy ze sob ró nych wielko ci zestawu buforu p ucz cego (WB) systemu
cobas® 4800, zestawu do przygotowywania próbek w systemie cobas® 4800 oraz
zestawu do lizy 1 w systemie cobas® 4800. Przyk adowo, je li na pocz tku przebiegu
skanowana jest butelka z odczynnikiem WB z zestawu 96 testów, nale y u
odczynników z pozosta ych dwóch zestawów równie o rozmiarze 96 testów.
Uwaga: Chocia nie stanowi to optymalnego u ycia odczynników, w przebiegu zawieraj cym
1–6 próbek bakterii C. difficile mo na u
odczynnika MMX zestawu 24 testów Cdiff
w systemie cobas® 4800. Szczegó owe informacje dotycz ce zmiany wielko ci
zestawu zamieszczono w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu
cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff oraz w rozdziale „Wk adanie odczynników”.
Przebieg pracy
Test cobas® Cdiff to oznaczenie prowadzone z wykorzystaniem przebiegu pracy Full Workflow
w ramach oprogramowania cobas® 4800. Obejmuje on przygotowanie próbek w aparacie cobas x
480 oraz amplifikacj /detekcj w analizatorze cobas z 480. Przebieg mo e obejmowa tylko
oznaczenie Cdiff lub dodatkowo testy cobas® MRSA/SA i/lub cobas® HSV 1 oraz 2 w ramach
po czenia ró nych partii. Szczegó owe informacje zamieszczono w rozdziale „Przeprowadzanie
przebiegu pracy Full Workflow” oraz w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu
cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
19
cobas® Cdiff Test
Przenoszenie próbek do probówek z pod
®
em cobas PCR
1. U yj jednej poliestrowej wymazówki do przeniesienia stolca do probówki z pod em cobas®
PCR. Wyrzu drug wymazówk znajduj
si w opakowaniu. Nie dotykaj c cianek pojemnika ze
stolcem, zanurz ca kowicie ko cówk wymazówki w próbce stolca, a do ko ca sto kowej cz ci,
a nast pnie szybko j wyjmij i umie wymazówk z inokulatem w probówce z pod em cobas®
PCR. Nie nale y wykonywa oznaczenia, je li ilo próbki stolca nie umo liwia ca kowitego
zanurzenia ko cówki wymazówki.
2. Przyciskaj c trzonek wymazówki do ciany probówki, prze am go w miejscu szarego oznaczenia
naci cia. Zamknij probówk korkiem i zworteksuj przez co najmniej 5 sekund. Zdejmij korek i umie
probówk (probówki) w 24-pozycyjnym no niku próbek w celu przetworzenia. Wyrzu korki.
Uwaga: Test cobas® Cdiff zosta zatwierdzony do stosowania w po czeniu z zestawem
cobas® PCR Media and Swab Sample Kit. Nie nale y korzysta z innych rodzajów
urz dze i pod y.
Uwaga: Do przenoszenia stolca nale y korzysta wy cznie z jednej poliestrowej wymazówki.
Przeniesienie do probówki z pod em cobas® PCR nadmiaru stolca mo e
spowodowa powstanie grudek i/lub uzyskanie niewa nych wyników.
Uwaga: Próbki stolca nale y przenie do probówek z pod em cobas® PCR oznakowanych
odpowiednim kodem kreskowym umo liwiaj cym przetwarzanie w aparacie cobas x
480. W celu uzyskania informacji na temat procedur w ciwego kodowania
kreskowego nale y zapozna si z odpowiednim Podr cznikiem systemu — system
cobas® 4800 oraz list kodów kreskowych dopuszczalnych w systemie cobas® 4800.
Uwaga: Aby unikn zanieczyszczenia krzy owego zawiesin próbek stolca w pod u cobas®
PCR, do ponownego zamykania probówek po przetworzeniu nale y u ywa
dodatkowych korków do pojemników na próbki w pod u cobas® PCR w innym
kolorze (bezbarwnych; patrz rozdzia „Materia y opcjonalne”).
Uwaga: Obj to pod a cobas® PCR wystarcza do przeprowadzenia kilkukrotnych
oznacze próbek zawiesiny stolca w systemie cobas® 4800. Minimalna obj to
zawiesiny stolca konieczna do przeprowadzenia przebiegu testu cobas® Cdiff to 3 ml
w probówce z po ywk cobas® PCR.
®
Wykonywanie testu cobas Cdiff
Uwaga: Mo liwe jest przeprowadzenie testów cobas® MRSA/SA oraz cobas® Cdiff i/lub cobas®
HSV 1 oraz 2 w ramach po czenia ró nych partii w tym samym przebiegu. Wi cej
informacji mo na znale w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu
cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff.
1. Uruchom system i wykonaj procedury konserwacyjne, post puj c zgodnie z instrukcjami
zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku systemu — system cobas® 4800 w cz ci
„Konserwacja aparatu”.
2. Zgromad wszystkie wymagane odczynniki i materia y eksploatacyjne. W momencie rozpocz cia
przebiegu odczynniki, z wyj tkiem odczynników cobas® Cdiff MMX oraz Cofactor-3, musz mie
temperatur pokojow .
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
20
cobas® Cdiff Test
Uwaga: Wszystkie odczynniki i pojemniki na odczynniki s opatrzone kodem kreskowym i s
przeznaczone do jednokrotnego u ycia. Oprogramowanie cobas® 4800 ledzi u ycie
odczynników oraz pojemników na odczynniki i odrzuca wcze niej u ywane
odczynniki lub pojemniki na odczynniki.
3. Rozpocznij nowy przebieg i zdefiniuj dla niego zlecenie pracy. Zlecenie pracy mo na utworzy na
trzy sposoby:
Korzystaj c z edytora próbki przed umieszczeniem statywu z próbkami w aparacie cobas x
480 (przycisk „Editor” po prawej stronie menu g ównego). Zlecenia pracy mo na zapisa ,
edytowa i wczyta ponownie w razie potrzeby.
Przez skorzystanie z kreatora oprogramowania dla nowego przebiegu i umieszczenie próbek
w aparacie cobas x 480 po wy wietleniu takiego polecenia. Kody kreskowe próbek zostan
automatycznie zeskanowane i konieczne b dzie zdefiniowane danych wyników dla ka dej
próbki.
Przez skorzystanie z systemu LIS placówki.
Wi cej szczegó ów mo na znale w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas®
4800 dla testu cobas® Cdiff. Podczas wybierania danych wyników nale y zaznaczy opcj
„Cdiff”.
4. Umie próbki i zdefiniuj/wybierz zlecenie pracy lub skorzystaj z systemu LIS, zale nie od tego co
dzie w ciwe. Domy lnie zaznaczona jest opcja „Unload sample carriers after transferring to
deep well plate”. Umo liwia to operatorowi pozyskanie pozosta ych próbek zawiesiny stolca tak
szybko jak to mo liwe po pobraniu z nich porcji na potrzeby przetwarzania w aparacie cobas x
480. Je li konieczne jest przechowywanie, pojemniki z zawiesin stolca nale y zamkn nowym
korkiem (patrz rozdzia „Materia y opcjonalne”).
5. Post puj zgodnie ze wskazówkami kreatora oprogramowania i za aduj materia y eksploatacyjne.
Nie nale y umieszcza pojedynczych ko cówek ani ich wyjmowa z cz ciowo wykorzystanego
statywu, gdy oprogramowanie ledzi liczb pozosta ych ko cówek. Je li liczba ko cówek b dzie
niewystarczaj ca do przeprowadzenia przebiegu, oprogramowanie poinformuje o tym fakcie
ytkownika.
6. Za aduj odczynniki do przygotowywania próbek do pojemników na odczynniki opatrzonych kodem
kreskowym. Pojemniki na odczynniki s dost pne w dwóch rozmiarach: 200 ml i 50 ml. Post puj
zgodnie ze wskazówkami kreatora oprogramowania w celu wybrania pojemnika na odczynniki
odpowiednich rozmiarów. Kody kreskowe pojemnika na odczynniki musz znajdowa si po
prawej stronie no nika. Za aduj odczynniki do przygotowywania próbek, stosuj c metod
„zeskanuj, zeskanuj, w , umie ”:
Zeskanuj kod kreskowy butelki odczynnika.
Zeskanuj kod kreskowy pojemnika na odczynniki.
odczynnik do pojemnika.
Umie wype niony pojemnik na odczynniki w przypisanej mu pozycji w no niku na odczynniki.
Uwaga: System cobas® 4800 ma wewn trzny zegar, kontroluj cy czas, przez jaki odczynniki
znajduj si w systemie. Od momentu zeskanowania WB jest 1 godzina do
zako czenia procesu adowania i klikni cia przycisku „Start”. Na zak adce
„Workplace” wy wietlany jest zegar odliczaj cy czas. System nie zezwoli na
rozpocz cie przebiegu, je eli czas wy wietlany przez zegar aparatu up yn .
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
21
cobas® Cdiff Test
Uwaga: Aby zapewni w ciwe przeniesienie odczynnika MGP, zworteksuj lub energicznie
wstrz nij fiolk odczynnika MGP niezw ocznie przed umieszczeniem jej w pojemniku
na odczynniki.
7. Umie odczynniki do amplifikacji/detekcji (Cdiff MMX oraz Cofactor-3), proteinaz K (PK)
i kontrole [Cdiff (+) C, IC oraz (–) C] bezpo rednio w no niku na odczynniki. W celu zapobie enia
zanieczyszczeniu konieczna jest zmiana r kawiczek po pracy z kontrolami dodatnimi.
Uwaga: Kreator oprogramowania obliczy optymaln ilo i wielko zestawu odczynnika
MMX cobas® Cdiff do u ycia. Zostanie to odzwierciedlone w kolumnie „Kit size” na
ekranie umieszczania odczynników MMX i Cofactor. Aby u
odczynnika MMX
cobas® Cdiff z zestawu o innym rozmiarze, kliknij przycisk „Change kit size”.
8. Po pomy lnym przebiegu przygotowania próbek przyciski „Sample Preparation results” oraz
„Unload” stan si dost pne. W razie potrzeby wybierz przycisk „Sample Preparation results”
w celu przeanalizowania wyników, a nast pnie wybierz przycisk „Unload”, aby wy adowa no niki
na p ytki. Mo na równie wybra przycisk „Unload” w celu wy adowania no nika na p ytki bez
przegl dania wyników. Patrz odpowiedni Podr cznik u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu
cobas® Cdiff.
9. Aby uszczelni p ytk mikrodo kow , przenie p ytk do analizatora cobas z 480 i rozpocz
przebieg amplifikacji oraz detekcji, post puj zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi
w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff.
Uwaga: System cobas® 4800 ma wewn trzny zegar, kontroluj cy czas, jaki up ywa od
momentu dodania przygotowanych próbek do aktywowanego odczynnika Master Mix.
Amplifikacj i detekcj nale y rozpocz jak najszybciej, jednak nie pó niej ni
90 minut od zako czenia przebiegu w aparacie cobas x 480. Na zak adce „Workplace”
wy wietlany jest zegar odliczaj cy czas. System przerwie przebieg, je eli ten czas
zostanie przekroczony.
10. Po zako czeniu procesu amplifikacji i detekcji wy aduj p ytk mikrodo kow z analizatora cobas z
480.
11. Post puj zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku u ytkownika
systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff w celu przeanalizowania i zatwierdzenia wyników.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
22
cobas® Cdiff Test
Wyniki
Kontrola jako ci i wa no
wyników
Ka dy przebieg obejmuje jeden zestaw kontroli dodatniej i ujemnej testu cobas® Cdiff. W przypadku
ka dego przebiegu, aby przez oprogramowanie cobas® 4800 zosta y wy wietlone mo liwe do
zaraportowania wyniki testu cobas® Cdiff, musz zosta uzyskane wa ne wyniki zarówno dla kontroli
dodatniej, jak i ujemnej.
Kontrola dodatnia
Kontrola dodatnia Cdiff (+) zawiera niezaka ny DNA plazmidowy bakterii C. difficile. U ycie kontroli
Cdiff (+) umo liwia monitorowanie etapów izolacji kwasu nukleinowego, amplifikacji i detekcji
w danym przebiegu. Wynik kontroli Cdiff (+) musi by oznaczony jako „Valid”. Je eli wyniki kontroli
Cdiff (+) s stale niewa ne, skontaktuj si z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche w celu
uzyskania pomocy technicznej.
Kontrola ujemna
Wynik kontroli (–) musi by oznaczony jako „Valid”. Je eli wyniki kontroli (–) s stale niewa ne,
skontaktuj si z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche w celu uzyskania pomocy technicznej.
Kontrola wewn trzna
Kontrola wewn trzna to rekombinowany fag lambda zawieraj cy sekwencje losowe oraz docelowe
dla swoistych dla kontroli wewn trznej primerów i sondy. Kontrola wewn trzna jest dodawana do
wszystkich próbek oraz kontroli dodatniej i ujemnej podczas przygotowywania próbek w aparacie
cobas x 480. U ycie kontroli wewn trznej umo liwia monitorowanie etapów izolacji kwasu
nukleinowego, amplifikacji i detekcji dla danej próbki. Kontrola wewn trzna jest równie wymagana
do okre lania wa no ci kontroli danego przebiegu.
Interpretacja wyników
Uwaga: Ca y proces walidacji testu i przebiegu jest realizowany przez oprogramowanie
cobas® 4800.
Uwaga: Wa ny przebieg mo e obejmowa zarówno wa ne, jak i niewa ne wyniki próbek.
W przypadku wa nego przebiegu wyniki badania próbek interpretuje si w sposób, który przedstawia
Tabela 1.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
23
cobas® Cdiff Test
®
Tabela 1
Interpretacja wyników testu cobas Cdiff
®
Test cobas Cdiff
POS Cdiff
NEG Cdiff
Raport wyniku i jego interpretacja
Wynik dodatni dla Cdiff
Wynik badania próbki na obecno
DNA C. difficile jest dodatni.
Wynik ujemny dla Cdiff*
DNA C. difficile, je li jest obecne, mog o nie zosta wykryte.
Wynik niewa ny
Invalid
Wynik testu jest niewa ny. W celu otrzymania wa nego wyniku ponownie przeprowad
test oryginalnej próbki. Umie nowy korek na probówce z zawiesin stolca,
w przypadku której uzyskano niewa ny wynik, i zworteksuj przez co najmniej
5 sekund. Dodaj 0,5 ml wymieszanej zawiesiny stolca do nowej probówki z po ywk
®
cobas PCR. Zamknij probówk z rozcie czon zawiesin i zworteksuj przez co
najmniej 5 sekund. Zdejmij korek i umie probówk z rozcie czon zawiesin
w 24-pozycyjnym no niku próbek w celu przetworzenia.
Brak wyników dla próbki
Failed
Zapoznaj si z instrukcjami zamieszczonymi w odpowiednim Podr czniku u ytkownika
®
®
systemu cobas 4800 dla testu cobas Cdiff dotycz cymi przegl dania oflagowa
przebiegu i zalecanych czynno ci. W rzadkich przypadkach wyst pienia b du
podczas pipetowania (np. z powodu grudki lub innej niedro no ci) nale y oryginaln
probówk z zawiesin stolca zamkn nowym korkiem i umie ci w wirówce. Rozp
wirówk do 1800 RCF (lub 1800 x g) i zatrzymaj. Dopilnuj, aby probówka nie by a
wstrz sana ani nie zosta a wymieszana po wirowaniu. Zdejmij korek i umie
probówk z zawiesin w 24-pozycyjnym no niku próbek w celu przetworzenia.
* Wynik ujemny nie wyklucza obecno ci DNA C. difficile, poniewa wyniki s zale ne od odpowiedniego pobrania
próbki, braku inhibitorów oraz obecno ci DNA w ilo ci umo liwiaj cej wykrycie.
Niewa ne wyniki mog zosta uzyskane, je li próbka zawiera nadmiar stolca lub substancje hamuj ce, które
uniemo liwiaj izolacj docelowego kwasu nukleinowego i/lub amplifikacj oraz detekcj . Znane substancje
wp ywaj ce na wynik testu zamieszczono w rozdziale „Ograniczenia metody”.
Uwaga: Minimalna obj to
®
zawiesiny stolca wymagana do przeprowadzenia testu cobas Cdiff to 3 ml.
Ograniczenia metody
1. Test cobas® Cdiff zosta zatwierdzony do u ycia wy cznie z próbkami nieuformowanego stolca
przeniesionymi do pod a cobas® PCR zgodnie z informacjami zamieszczonymi w niniejszej
instrukcji.
2. Uzyskanie wiarygodnych wyników zale y od w ciwego pobrania próbki, transportu,
przechowywania oraz przetwarzania. Nale y post powa zgodnie z procedurami opisanymi
w niniejszej instrukcji (okre lanej równie mianem ulotki do czonej do opakowania) oraz
w odpowiednim Podr czniku u ytkownika systemu cobas® 4800 dla testu cobas® Cdiff.
3. Mo liwo wykrycia DNA C. difficile zale y od liczby mikroorganizmów znajduj cych si w próbce
i mog na ni wp ywa metody pobierania/przetwarzania próbek, hospitalizacje w wywiadzie,
schemat antybiotykoterapii i szczepy C. difficile.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
24
cobas® Cdiff Test
4. Wyniki fa szywie ujemne lub niewa ne mog wynika z wp ywu ró nych substancji. Do testu
cobas® Cdiff do czona jest kontrola wewn trzna, aby pomóc w identyfikacji próbek
zawieraj cych substancje mog ce zak óca izolacj kwasu nukleinowego i amplifikacj w trakcie
reakcji PCR. Niektóre czynniki wp ywaj ce na wyniki testu s nast puj ce:
Próbki zawieraj ce powy ej 25% (udzia wagowo-obj to ciowy) luzu mog dawa wyniki
fa szywie ujemne.
5. Wynik dodatni wskazuje na obecno DNA C. difficile, jednak niekoniecznie potwierdza
wyst powanie ywych mikroorganizmów. Z tego powodu wynik dodatni niekoniecznie musi
wskazywa na niepowodzenie leczenia zaka enia.
6. Mutacje lub zmiany polimorficzne w obszarach wi zania primerów lub sond mog wp ywa na
wykrywanie nowych lub nieznanych wariantów, co mo e skutkowa uzyskaniem fa szywie
ujemnego wyniku testu cobas® Cdiff.
7. Warto
predykcyjna oznaczenia zale y do cz sto ci wyst powania choroby w danej populacji.
8. Dodanie do odczynnika Master Mix cobas® 4800 Cdiff enzymu AmpErase umo liwia selektywn
amplifikacj docelowego DNA; jednak aby unikn zanieczyszczenia odczynników i mieszanin
amplifikacyjnych, konieczne jest stosowanie dobrej praktyki laboratoryjnej i dok adne
przestrzeganie procedur wyszczególnionych w niniejszej instrukcji.
9. Tego produktu mog u ywa wy cznie osoby przeszkolone w zakresie technik PCR i u ywania
systemu cobas® 4800.
10. Zatwierdzono u ycie tego produktu tylko z aparatem cobas x 480 i analizatorem cobas z 480.
Z tym produktem nie mo na stosowa adnych innych urz dze do przygotowania próbek ani
systemów do PCR.
11. Z uwagi na ró nice mi dzy technologiami zaleca si , aby przed rozpocz ciem korzystania z innej
technologii u ytkownik przeprowadzi w laboratorium badania korelacji stosowanych metod w celu
zidentyfikowania wyst puj cych mi dzy nimi ró nic technologicznych i sprawdzenia nowej
procedury.
12. Zanieczyszczenie krzy owe próbek mo e spowodowa wyniki fa szywie dodatnie. System cobas®
4800 to zautomatyzowany aparat do PCR w czasie rzeczywistym opracowany w celu minimalizacji
ryzyka zanieczyszczenia krzy owego podczas przetwarzania próbki oraz ekstrakcji, amplifikacji
i detekcji kwasu nukleinowego. W celu sprawdzenia niezawodno ci systemu przeprowadzono
symulowane, niekliniczne badanie naprzemienne na panelu zawieraj cym spreparowane próbki
wysoko dodatnie i ujemne, aby oceni teoretyczny wspó czynnik zanieczyszczenia krzy owego
systemu. Próbki wysoko dodatnie mia y warto ci Ct ni sze ni obserwowane w przypadku 95%
pacjentów zaka onych w grupie docelowej. Wspó czynnik zanieczyszczenia krzy owego w tym
badaniu naprzemiennym zosta okre lony jako 0,24% (1/423). Wspó czynniki zanieczyszczenia
krzy owego w warunkach klinicznych zale od odsetka próbek wysoko dodatnich oraz cz sto ci
wyst powania choroby. Rutynowe kliniczne wspó czynniki zanieczyszczenia krzy owego powinny
by znacznie ni sze ni obserwowane w tym badaniu i nale y je oceni w warunkach u ytkownika.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
25
cobas® Cdiff Test
Ocena skuteczno ci w badaniach nieklinicznych
Czu
analityczna
Czu
analityczn (granic wykrywalno ci [ang. Limit of Detection, LOD]) dla testu cobas® Cdiff
okre lono, prowadz c analizy ocenionych ilo ciowo hodowli C. difficile rozcie czonych do kilku
poziomów st
w stanowi cych t o ujemnych próbkach zawiesiny stolca w pod u cobas® PCR.
Wszystkie poziomy przebadano z u yciem testu cobas® Cdiff, korzystaj c z trzech niepowtarzalnych
serii odczynników testu cobas® Cdiff. W przypadku ka dego poziomu przebadano co najmniej
21 powtórze na seri odczynnika. Granica wykrywalno ci (LOD) dla tego testu zosta a okre lona
jako docelowe st enie, które mo e zosta wykryte jako dodatnie w 95% testowanych powtórze na
podstawie wyników uzyskanych z u yciem serii odczynników o najni szej wydajno ci.
Informacje dotycz ce siedmiu szczepów C. difficile wykorzystanych w badaniu czu
zawiera Tabela 2.
Tabela 2
ci analitycznej
®
Granica wykrywalno ci (LOD) dla testu cobas Cdiff
LOD (CFU/wymaz)
Identyfikator szczepu
Toksynotyp
Typ
REA*
Typ
†
PFG
Rybotyp
Fenotyp
ATCC 43255 (VPI 10463)
0
Nie
dotyczy
Nie
dotyczy
087
ATCC BAA-1382 (630)
0
R 23
Nie
dotyczy
CDC 204118
III
BI 8
R12087 (CD196)
III
2748-06
Wed ug
odsetka
wyników
dodatnich
Wed ug
analizy
Probit
A+B+CDT-
113
90
012
A+B+CDT-
81
83
NAP1
027
A+B+CDT+
54
42
BI
NAP1
027
A+B+CDT+
54
54
V
Nie
dotyczy
Nie
dotyczy
078
Nie dotyczy
54
45
ATCC 43598 (1470)
VIII
Nie
dotyczy
Nie
dotyczy
017
A-B+
225
130
F15
XII
Nie
dotyczy
Nie
dotyczy
Nie
dotyczy
Nie dotyczy
54
59
†
* Analiza z wykorzystaniem enzymów restrykcyjnych. Elektroforeza elowa w polu pulsacyjnym.
Detekcja genotypów bakterii C. difficile
Granic wykrywalno ci testu cobas® Cdiff dla 28 szczepów toksynogennych reprezentuj cych
dodatkowe toksynotypy zweryfikowano przez oznaczenie 40 powtórze na poziom przy kilku
poziomach. Rozcie czenia i próbki testowe przygotowano w podobny sposób, jak w przypadku
opisanego powy ej badania granicy wykrywalno ci (LOD). Najni szy poziom, w przypadku którego
odsetek trafie wynosi co najmniej 95%, zawiera Tabela 3.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
26
cobas® Cdiff Test
Wszystkie 28 szczepów toksynogennych (Tabela 3) zosta o wykrytych jako dodatnie w 95%
powtórze badanych przy st eniach mieszcz cych si w zakresie od 77,9 CFU/wymaz do
460 CFU/wymaz.
Tabela 3
Podsumowanie wyników weryfikacji toksynogennych szczepów C. difficile
Szczep
Toksynotyp
Rybotyp
St .
(CFU/wymaz)
Odsetek wyników dodatnich
EX 623
I
102
77,9
95,0%
AC 008
II
103
77,9
95,0%
SE 844
IIIa
080
234
100,0%
55767
IV
023
77,9
100,0%
SE 881
V
045
234
100,0%
51377
VI
Nie dotyczy
234
100,0%
57267
VII
063
77,9
97,5%
51680
IX
019
77,9
100,0%
8864
X
036
77,9
97,5%
R 9367
XIII
070
77,9
97,5%
R 10870
XIV
111
234
100,0%
R 9385
XV
122
234
100,0%
SUC36
XVI
078
234
100,0%
J9965
XVII
Nie dotyczy
460
97,5%
K095
XVIII
014
234
95,0%
TR13
XIX
Nie dotyczy
234
97,5%
TR14
XX
Nie dotyczy
77,9
100,0%
CH6223
XXI
Nie dotyczy
234
100,0%
CD07-468
XXII
Nie dotyczy
234
100,0%
8785
XXIII
Nie dotyczy
234
95,0%
597B
XXIV
131
234
97,5%
7325
XXV
027
234
100,0%
7459
XXVI
Nie dotyczy
234
95,0%
KK2443-2006
XXVII
Nie dotyczy
234
100,0%
CD08-070
XXVIII
126
234
97,5%
CD07-140
XXIX
056
234
97,5%
ES 130
XXX
Nie dotyczy
234
100,0%
WA 151
XXXI
Nie dotyczy
460
100,0%
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
27
cobas® Cdiff Test
Precyzja
Wewn trzne badanie precyzji zosta o przeprowadzone z u yciem panelu sk adaj cego si z hodowli
C. difficile rozcie czonych w ujemnych próbkach zawiesiny stolca w pod u cobas® PCR do st
poni ej granicy wykrywalno ci (LOD), w pobli u warto ci LOD oraz powy ej warto ci LOD testu
cobas® Cdiff. Przebadany zosta równie poziom ujemny sk adaj cy si wy cznie z zawiesiny stolca
w pod u cobas® PCR. W badaniu wykorzystano trzy niepowtarzalne serie odczynników testu
cobas® Cdiff oraz trzy aparaty, wykonuj c w sumie 36 przebiegów w ci gu 12 dni. Opis paneli
precyzji oraz podsumowanie badania zawiera Tabela 4. Analiza czynników zmienno ci (Tabela 5)
sugerowa a, e najwi ksza zmienno docelowych warto ci Ct jest przypisywana zmienno ci
w ramach przebiegu (losowej) i czynnikom zale nym od serii (odpowiednio 60,0% oraz 25,3%) dla
st
równych lub zbli onych do warto ci LOD. W przypadku st
przekraczaj cych warto
LOD, wi kszo zmienno ci warto ci Ct jest przypisywana zmienno ci w ramach przebiegu (losowej)
oraz czynnikom zale nym od aparatu (odpowiednio 72,5% oraz 24,7%). Wyniki (Tabela 6) pokazuj ,
e docelowe warto ci Ct mia y ogóln warto CV (%) równ 1,5% dla st
równych warto ci LOD
oraz 1,1% dla st
powy ej warto ci LOD.
Tabela 4
Wewn trzne badanie dok adno ci: analiza wyników dodatnich
95% CL
Cz on panelu
Liczba
testowanych
Liczba wyników
dodatnich
Odsetek wyników
dodatnich
Dolny
Górny
Ujemne
72
0
0,0%
0,0%
5,0%
< 1 x LOD
72
21
29,2%
19,0%
41,1%
~ 1 x LOD
72
72
100,0%
95,0%
100,0%
~ 3 x LOD
72
72
100,0%
95,0%
100,0%
LOD = granica wykrywalno ci
Tabela 5
Analiza czynników zmienno ci dla cz onów panelu precyzji
Czynniki zmienno ci/procent udzia u w wyniku ca kowitym
Poziom
rednia
~ 1 x LOD
38,5
~ 3 x LOD
37,5
Razem
Seria
Aparat
Wielko
zestawu
Dzie
Losowe
0,0789
0,0189
0,0001
0,0270
0,1875
0,3123
25,25%
6,04%
0,03%
8,65%
60,03%
100,00%
0,0047
0,0404
0,0000
0,0000
0,1188
0,1638
2,84%
24,65%
0,00%
0,00%
72,51%
100,00%
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
28
cobas® Cdiff Test
Tabela 6
Odchylenia standardowe oraz wspó czynniki zmienno ci (%) analizy dla cz onów panelu precyzji
Czynniki SD/warto
Poziom
rednia
~ 1 x LOD
38,5
~ 3 x LOD
37,5
procentowa CV
Razem
Seria
Aparat
Wielko
zestawu
0,28
0,14
0,01
0,16
0,43
0,56
0,73%
0,36%
0,03%
0,43%
1,12%
1,45%
0,07
0,20
0,00
0,00
0,34
0,40
0,18%
0,54%
0,00%
0,00%
0,92%
1,08%
Dzie
Losowe
Swoisto
analityczna
W celu przeprowadzenia oceny swoisto ci analitycznej testu cobas® Cdiff wykonano testy z u yciem
nast puj cych paneli mikroorganizmów:
1) 103 bakterii, grzybów i wirusów, które mog wyst powa w próbkach ka u oraz jednej komórki
ludzkiej (Tabela 7);
2) 28 mikroorganizmów z rodzaju Clostridium, w tym nietoksynogennych szczepów C. difficile (* na
potrzeby badania cytomegalowirus (HHV5) zosta dodany w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia
2,0 x 103 PFU/ml, ludzki adenowirus typu 40 w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia
2,2 x 103 PFU/ml oraz ludzki rotawirus w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 9,8 x 103 PFU/ml —
Tabela 8).
Wszystkie bakterie i komórki ludzkie zosta y dodane w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia
1 x 106 j.*/ml, natomiast wszystkie wirusy zosta y dodane w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia
1 x 105 j.*/ml, z wyj tkiem cytomegalowirusa (HHV5), ludzkiego adenowirusa typu 40 oraz ludzkiego
rotawirusa, które zosta y dodane w celu uzyskania ni szych st
z powodu ogranicze zwi zanych
ze st eniem roztworu podstawowego. Testy zosta y przeprowadzone z u yciem samych mikroorganizmów lub przy obecno ci jednego z dwóch izolatów szczepów C. difficile w st eniu
wynosz cym 3-krotno granicy wykrywalno ci (LOD) testu cobas® Cdiff. Wyniki wskazuj , e aden
z tych mikroorganizmów nie zak óca wykrywania docelowych typów Cdiff. W przypadku adnego
z nich nie uzyskano fa szywie dodatniego wyniku przy braku docelowego typu C. difficile.
Swoisto
analityczn
Clostridium botulinum potwierdzono z u yciem programu BLAST
w porównaniu z baz danych sekwencji nukleotydowych GenBank w celu symulacji etapu tworzenia
amplikonu PCR.
* Ilo bakterii by a okre lana jako liczba jednostek tworz cych koloni (CFU)/ml, ilo ludzkich
komórek by a podawana jako liczba komórek/ml, a ilo wirusów definiowano jako liczb jednostek
tworz cych ysink (PFU)/ml, z wyj tkiem nast puj cych mikroorganizmów. Chlamydia trachomatis
oznaczono ilo ciowo jedynie jako cia ko podstawowe (EB)/ml. Cytomegalowirus, ludzki echowirus
oraz ludzki enterowirus oznaczono ilo ciowo jako IU/ml.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
29
cobas® Cdiff Test
Tabela 7
Mikroorganizmy i komórki ludzkie
Abiotrophia defectiva
Acinetobacter baumannii
Acinetobacter lwoffii
Aeromonas hydrophila
Alcaligenes faecalis subsp. faecalis
Anaerococcus tetradius
Bacillus cereus ATCC 11778
Bacillus cereus ATCC 13472
Bacteroides caccae
Bacteroides merdae
Bacteroides stercoris
Bifidobacterium adolescentis
Bifidobacterium longum
Campylobacter coli
Campylobacter jejuni
Candida albicans
Candida catenulata
Cedecea davisae
Chlamydia trachomatis Serovar L2
Citrobacter amalonaticus
Citrobacter freundii
Citrobacter koseri
Citrobacter sedlakii
Collinsella aerofaciens
Corynebacterium genitalium
Desulfovibrio piger
Edwardsiella tarda
Eggerthella lenta
Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
Enterococcus casseliflavus
Enterococcus cecorum
Enterococcus dispar
Enterococcus faecalis
Enterococcus faecium vanA
Enterococcus gallinarum vanC
Enterococcus hirae
Enterococcus raffinosus
Escherichia coli ATCC 11775
Escherichia coli ATCC 25922
Escherichia fergusonii
Escherichia hermannii
Fusobacterium varium
Gardnerella vaginalis
Gemella morbillorum
Hafnia alvei
Ludzkie komórki HCT-15
Helicobacter fennelliae
Helicobacter pylori
Klebsiella oxytoca
Klebsiella pneumoniae subsp.
pneumoniae
Lactobacillus acidophilus
Lactobacillus reuteri
Lactococcus lactis
Leminorella grimontii
Listeria grayi
Listeria innocua
Listeria monocytogenes
Mitsuokella multacida
Mobiluncus curtisii
Moellerella wisconsensis
Morganella morganii
Neisseria gonorrhoeae
Peptoniphilus asaccharolyticus
Peptostreptococcus anaerobius
Plesiomonas shigelloides
Porphyromonas asaccharolytica
Prevotella melaninogenica
Proteus mirabilis
Proteus penneri
Providencia alcalifaciens
Providencia rettgeri
Providencia stuartii
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas putida
Ruminococcus bromii
Salmonella choleraesuis subsp.
choleraesuis
Salmonella enterica subsp. arizonae
(f.k.a. Salmonella choleraesuis subsp.
arizonae)
Salmonella enterica subsp. enterica
serovar Choleraesuis
Serratia liquefaciens
Serratia marcescens
Shigella boydii
Shigella dysenteriae
Shigella sonnei
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Stenotrophomonas maltophilia
Streptococcus agalactiae
Streptococcus dysgalactiae
Streptococcus intermedius
Streptococcus uberis
Trabulsiella guamensis
Veillonella parvula
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Yersinia bercovieri
Yersinia rohdei
Cytomegalowirus (HHV5)*
Ludzki adenowirus typu 40*
Ludzki wirus Coxsackie A10
Ludzki enterowirus 11
Ludzki enterowirus 71
Ludzki rotawirus*
Norowirus GII
3
* Na potrzeby badania cytomegalowirus (HHV5) zosta dodany w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 2,0 x 10 PFU/ml,
3
ludzki adenowirus typu 40 w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie st enia 2,2 x 10 PFU/ml, a ludzki rotawirus w ilo ci umo liwiaj cej
3
uzyskanie st enia 9,8 x 10 PFU/ml.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
30
cobas® Cdiff Test
Tabela 8
Mikroorganizmy z rodzaju Clostridium, w tym nietoksynogenne szczepy C. difficile
Clostridium beijerinckii
Clostridium bifermentans
Clostridium bolteae
Clostridium botulinum*
Clostridium butyricum
Clostridium chauvoei
Clostridium difficile serogrupa B
(nietoksynogenne)
Clostridium difficile serogrupa I
(nietoksynogenne)
Clostridium fallax
Clostridium haemolyticum
Clostridium histolyticum
Clostridium innocuum
Clostridium methylpentosum
Clostridium nexile
Clostridium novyi
Clostridium orbiscindens
(Flavonifractor plautii po zmianie
nazwy)
Clostridium paraputrificum
Clostridium perfringens
Clostridium ramosum
Clostridium scindens
Clostridium septicum
Clostridium sordellii
Clostridium sphenoides
Clostridium spiroforme
Clostridium sporogenes
Clostridium symbiosum
Clostridium tertium
Clostridium tetani
-
-
* Na podstawie programu BLAST.
Substancje wp ywaj ce na wynik testu
Pod k tem potencjalnego wp ywu na wyniki testu cobas® Cdiff przebadano 26 cz sto stosowanych
leków, a tak e t uszcz wydalany ze ka em, krew pe
i luz. Wszystkie substancje przebadano przy
st eniach wy szych ni oczekiwane w przypadku ich pobierania na wymazówce wraz z próbk
stolca. Ilo substancji wp ywaj cej na wynik testu jest wyra ana w postaci st enia w pierwotnej
próbce stolca. Dwa izolaty szczepów C. difficile zosta y dodane w ilo ci umo liwiaj cej uzyskanie
3-krotno ci granicy wykrywalno ci (LOD) testu cobas® Cdiff i wykorzystane jako typy docelowe
w tych testach. Nie stwierdzono wp ywu na wyniki testu w przypadku substancji egzogennych.
W przypadku t uszczu wydalanego z ka em nie obserwowano wp ywu do st enia 28%, w przypadku
krwi pe nej do poziomu 50%, a w przypadku luzu — do warto ci 25%. Podsumowanie tych wyników
zawiera Tabela 9.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
31
cobas® Cdiff Test
Tabela 9
Wyniki badania substancji wp ywaj cych na wynik testu
Substancja
St
enie
Wyniki
4–28%
(udzia wagowo-obj.)
Brak wp ywu
25, 50%
(udzia obj to ciowy)
Brak wp ywu
25, 50%
(udzia wagowo-obj.)
Brak wp ywu do 25%
(udzia wagowo-obj.)
Tums
10% (udzia wagowo-obj.)
Brak wp ywu
Wankomycyna
Brak wp ywu
metronidazol
Brak wp ywu
®
Brak wp ywu
Brak wp ywu
10% (udzia obj to ciowy)
Brak wp ywu
Brak wp ywu
Krem Preparation H with Bio-Dyne (Wyeth)
Brak wp ywu
GYNOL II
Brak wp ywu
Brak wp ywu
Anusol Plus
Brak wp ywu
Filtr przeciws oneczny
Brak wp ywu
Brak wp ywu
Brak wp ywu
Czopki SAB-Dimenhydrinate (SABEX )
Brak wp ywu
Olej mineralny
Brak wp ywu
Naturalny rodek przeczyszczaj cy pochodzenia ro linnego Equate
Brak wp ywu
Dulcolax
Brak wp ywu
Fleet (CB Fleet Company)
Brak wp ywu
K-Y Jelly/Gelée (McNeil-PPC)
Brak wp ywu
Aerozol donosowy Afrin Original
Brak wp ywu
Wyci g wodny z oczaru wirginijskiego
yn z
1 przetarcia/wymazówki
Brak wp ywu
Siarczan baru o wysokiej g sto ci E-Z-HD™ do sporz dzania
zawiesiny (E-Z-EM Canada)
Brak wp ywu
Kwas palmitynowy
Brak wp ywu
Kwas stearynowy
Brak wp ywu
Aleve
Brak wp ywu
uszcz wydalany z ka em
Krew pe na
luz
Imodium AD
rodek zmi kczaj cy stolec
®
Pepto-Bismol (Procter & Gamble)
Ma
z nystatyn USP
®
®
®
Krem przeciwko wi dowi Vagisil
®
®
Monistat 7
Vaseline™
®
®
®
®
®
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
32
cobas® Cdiff Test
Korelacja
Skuteczno testu cobas® Cdiff porównano z zatwierdzonym przez FDA i posiadaj cym
oznakowanie CE najnowocze niejszym testem referencyjnym NAT, korzystaj c z oznacze cytotoksyczno ci hodowli tkankowej izolatów C. difficile z hodowli bezpo rednich jako metody
referencyjnej. Próbki stolca zgromadzone w 3 szpitalach/o rodkach medycznych zosta y przebadane
z u yciem testu cobas® Cdiff oraz referencyjnego testu NAT, a tak e przes ane do laboratorium
referencyjnego w celu przeprowadzenia bada z u yciem hodowli tkankowej z ocen
cytotoksyczno ci.
Test cobas® Cdiff i najnowocze niejszy test referencyjny NAT zosta y wykonane zgodnie
z instrukcjami producentów. Test cytotoksyczno ci w hodowli tkankowej zosta przeprowadzony
z wykorzystaniem procedury hodowli bezpo redniej. Z ka dej próbki stolca pobrano inokulat
umieszczany w zredukowanym wst pnie agarze zawieraj cym cykloseryn , cefoksytyn i fruktoz
(CCFA-HT). Podejrzewane kolonie identyfikowano jako bakterie C. difficile za pomoc barwienia
metod Grama, na podstawie nietolerancji warunków tlenowych i z u yciem testu Pro-Disk,
a nast pnie inokulowano w bulionie mi snym do hodowli w warunkach beztlenowych. Supernatant
pozyskany z hodowli w bulionie mi snym w warunkach beztlenowych zostanie nast pnie
przetworzony w celu wykrycia toksyny B bakterii C. difficile z wykorzystaniem testu cytotoksyczno ci
w hodowli tkankowej (test C. DIFFICILE TOX-B, Techlab).
Do udzia u w badaniu zakwalifikowano w sumie 1434 pacjentów z pi ciu o rodków. Z powodu
niekompletnych wyników wykluczono 156 pacjentów. W hodowli bezpo redniej wykryto 152 dodatnie
próbki C. difficile (cz sto wyst powania: 11,9%). Dane dotycz ce skuteczno ci testu cobas® Cdiff
i referencyjnego testu NAT w przypadku hodowli bezpo redniej zawiera Tabela 10 oraz Tabela 11.
Tabela 10
®
Test cobas Cdiff a hodowla bezpo rednia
Hodowla bezpo rednia
Test cobas
Cdiff
Czu
®
Dodatni
Ujemny
Razem
Dodatni
147
30
177
Ujemny
5
1 096
1 101
Razem
152
1 126
1 278
i swoisto
Czu
i swoisto testu cobas® Cdiff w porównaniu z hodowl bezpo redni wynios y odpowiednio
96,7% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 92,5–98,6%) oraz 97,3% (95% dwustronny przedzia
ufno ci: 96,2–98,1%).
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
33
cobas® Cdiff Test
Warto
predykcyjna wyniku dodatniego i ujemnego
Obserwowane warto ci predykcyjne wyniku dodatniego i ujemnego testu cobas® Cdiff dla próbek
w badaniu wynios y odpowiednio 83,1% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 76,7–88,3%) oraz 99,5%
(95% dwustronny przedzia ufno ci: 98,9–99,9%).
Tabela 11
Referencyjny test Nucleic Acid Test (NAT) w przypadku hodowli bezpo redniej
Hodowla bezpo rednia
Test
referencyjny
NAT
Czu
Dodatni
Ujemny
Razem
Dodatni
147
29
176
Ujemny
5
1 097
1 102
Razem
152
1 126
1 278
i swoisto
Czu
i swoisto testu referencyjnego NAT w porównaniu z hodowl bezpo redni wynios y
odpowiednio 96,7% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 92,5–98,6%) oraz 97,4% (95% dwustronny
przedzia ufno ci: 96,3–98,2%).
Korelacja z testem referencyjnym NAT
Dane dotycz ce skuteczno ci testu cobas® Cdiff w porównaniu z zatwierdzonym przez FDA
i posiadaj cym oznakowanie CE najnowocze niejszym testem referencyjnym NAT zawiera
Tabela 12.
Tabela 12
®
Test cobas Cdiff w porównaniu z testem referencyjnym Nucleic Acid Test (NAT)
Referencyjny test NAT
Test cobas
Cdiff
®
Dodatni
Ujemny
Razem
Dodatni
167
10
177
Ujemny
9
1 092
1 101
Razem
176
1 102
1 278
Odsetek zgodno ci wyników dodatnich i ujemnych
Odsetek zgodno ci wyników dodatnich i ujemnych testu cobas® Cdiff w porównaniu z referencyjnym
testem NAT wyniós odpowiednio 94,9% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 90,6–97,3%) oraz
99,1% (95% dwustronny przedzia ufno ci: 98,3–99,5%).
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
34
cobas® Cdiff Test
Dodatkowe informacje
Najwa niejsze cechy oznaczenia
Rodzaj próbki
Próbki nieuformowanego stolca
®
Wymagana ilo
próbki
®
4,3 ml po ywki cobas PCR w fiolce pierwotnej, do wykonania testu cobas Cdiff
wymagane s co najmniej 3 ml próbki.
Czas trwania testu
Wyniki s dost pne w ci gu 2,5 godziny po umieszczeniu próbki w systemie
(1–22 próbek).
Czu
Od 54 do 460 CFU/wymaz w zale no ci od izolatu.
analityczna
Swoisto
Nie stwierdzono reaktywno ci krzy owej ze 125 blisko spokrewnionymi
mikroorganizmami lub mikroorganizmami wyst puj cymi typowo w próbkach
stolca.
Reprezentatywno
Wszystkie znane szczepy C. difficile (toksynotypy 0–XXXI, z wyj tkiem
nietoksynogennych toksynotypów XI), w tym odpowiedzialny za wybuchy epidemii
hiperwirulentny szczep BI/NAP1/027.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
35
cobas® Cdiff Test
Oznaczenia
Na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR stosuje si nast puj ce oznaczenia.
Tabela 13
Oznaczenia stosowane na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR
Oprogramowanie pomocnicze
Wyrób do diagnostyki in vitro
Autoryzowany Przedstawiciel we
Wspólnocie Europejskiej
Dolna granica przypisanego zakresu
Arkusz kodów kreskowych
Wytwórca
Kod partii
Przechowywa z dala od wiat a
Zagro enie biologiczne
Zawarto
Numer katalogowy
Przestrzega zakresu temperatury
Sprawd w instrukcji obs ugi
Plik definicji testów
Zawarto
Górna granica przypisanego zakresu
zestawu
wystarczaj ca na <n> testów
Dystrybucja
Termin wa no ci
Wy cznie do oceny dzia ania
w badaniach IVD
Numer pozycji handlu globalnego
Ten produkt spe nia wymogi dyrektywy Wspólnoty Europejskiej 98/79/WE
dotycz cej diagnostycznych urz dze medycznych do stosowania in vitro.
Linia pomocy technicznej dla klientów w Stanach Zjednoczonych 1-800-526-1247
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
36
cobas® Cdiff Test
Producent i dystrybutorzy
Tabela 14
Producent i dystrybutorzy
Roche Molecular Systems, Inc.
1080 US Highway 202 South
Branchburg, NJ 08876 USA
Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Str. 116
68305 Mannheim
Germany
Roche Diagnostics (Schweiz) AG
Industriestrasse 7
6343 Rotkreuz, Switzerland
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Straße 116
68305 Mannheim, Germany
Roche Diagnostics, SL
Avda. Generalitat, 171-173
E-08174 Sant Cugat del Vallès
Barcelona, Spain
Roche Diagnostica Brasil Ltda.
Av. Engenheiro Billings, 1729
Jaguaré, Building 10
05321-010 São Paulo, SP Brazil
Roche Diagnostics
201, boulevard Armand-Frappier
H7V 4A2 Laval, Québec, Canada
(For Technical Assistance call:
Pour toute assistance technique,
appeler le: 1-877 273-3433)
Roche Diagnostics
2, Avenue du Vercors
38240 Meylan, France
Distributore in Italia:
Roche Diagnostics S.p.A.
Viale G. B. Stucchi 110
20052 Monza, Milano, Italy
Distribuidor em Portugal:
Roche Sistemas de Diagnósticos Lda.
Estrada Nacional, 249-1
2720-413 Amadora, Portugal
Znaki towarowe i patenty
Patrz http://www.roche-diagnostics.us/patents
Copyright
©2016 Roche Molecular Systems, Inc.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
37
cobas® Cdiff Test
Pi miennictwo
1. Bartlett JG, Chang TW, Moon N, Onderdonk AB. Antibiotic-induced lethal enterocolitis in
hamsters: studies with eleven agents and evidence to support the pathogenic role of toxinproducing Clostridia. Am J Vet Res. 1978;39(9):1525-1530.
2. Larson HE, Price AB, Honour P, Borrielo SP. Clostridium difficile and the aetiology of
pseudomembranous colitis. Lancet. 1978;1(8073):1063-1066.
3. Bartlett JG. Clinical practice. Antibiotic-associated diarrhea. N Engl J Med. 2002;346(5):334-339.
4. McDonald LC, Owings M, Jernigan DB. Clostridium difficile infection in patients discharged from
US short-stay hospitals, 1996-2003. Emerg Infect Dis. 2006;12(3):409-415.
5. Loo VG, Poirier L, Miller MA, et al. A predominantly clonal multi-institutional outbreak of
Clostridium difficile-associated diarrhea with high morbidity and mortality. N Engl J Med.
2005;353(23):2442-2449.
6. Song X, Bartlett JG, Speck K, Naegeli A, Carroll K, Perl TM. Rising economic impact of
clostridium difficile-associated disease in adult hospitalized patient population. Infect Control Hosp
Epidemiol. 2008;29(9):823-828.
7. Wolfhagen MJ, Torensma R, Fluit AC, Verhoef J. Toxins A and B of Clostridium difficile. FEMS
Microbiol Rev. 1994;13(1):59-64.
8. Johnson S, Sambol SP, Brazier JS, et al. International typing study of toxin A-negative, toxin Bpositive Clostridium difficile variants. J Clin Microbiol. 2003;41(4):1543-1547.
9. Barbut F, Decré D, Lalande V, et al. Clinical features of Clostridium difficile-associated diarrhoea
due to binary toxin (actin-specific ADP-ribosyltransferase)-producing strains. J Med Microbiol.
2005;54(Pt 2):181-185.
10. Geric B, Rupnik M, Gerding DN, Grabnar M, Johnson S. Distribution of Clostridium difficile variant
toxinotypes and strains with binary toxin genes among clinical isolates in an American hospital. J
Med Microbiol. 2004;53(Pt 9):887-894.
11. Pépin J, Valiquette L, Alary ME, et al. Clostridium difficile-associated diarrhea in a region of
Quebec from 1991 to 2003: a changing pattern of disease severity. CMAJ. 2004;171(5):466-472.
12. Warny M, Pepin J, Fang A, et al. Toxin production by an emerging strain of Clostridium difficile
associated with outbreaks of severe disease in North America and Europe. Lancet.
2005;366(9491):1079-1084.
13. Bartlett JG. Narrative review: the new epidemic of Clostridium difficile-associated enteric disease.
Ann Intern Med. 2006;145(10):758-764.
14. Fekety R. Guidelines for the diagnosis and management of Clostridium difficile-associated
diarrhea and colitis. American College of Gastroenterology, Practice Parameters Committee. Am J
Gastroenterol. 1997;92(5):739-750.
15. Peterson LR, Manson RU, Paule SM, et al. Detection of toxigenic Clostridium difficile in stool
samples by real-time polymerase chain reaction for the diagnosis of C. difficile-associated
diarrhea. Clin Infect Dis. 2007;45(9):1152-1160.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
38
cobas® Cdiff Test
16. Sloan LM, Duresko BJ, Gustafson DR, Rosenblatt JE. Comparison of real-time PCR for detection
of the tcdC gene with four toxin immunoassays and culture in diagnosis of Clostridium difficile
infection. J Clin Microbiol. 2008;46(6):1996-2001.
17. Deshpande A, Pasupuleti V, Rolston DD, et al. Diagnostic accuracy of real-time polymerase chain
reaction in detection of Clostridium difficile in the stool samples of patients with suspected
Clostridium difficile infection: a meta-analysis. Clin Infect Dis. 2011;53(7):e81-90. Epub
2011/09/06.
18. Kufelnicka AM, Kirn TJ. Effective utilization of evolving methods for the laboratory diagnosis of
Clostridium difficile infection. Clin Infect Dis. 2011;52(12):1451-1457. Epub 2011/06/02.
19. Tenover FC, Baron EJ, Peterson LR, Pershing DH. Laboratory diagnosis of Clostridium difficile
infection can molecular amplification methods move us out of uncertainty? J Mol Diagn.
2011;13(6):573-582. Epub 2011/08/23.
20. Peterson LR, Mehta MS, Patel PA, Hacek DM, Harazin M, Nagwekar PP, et al. Laboratory testing
for Clostridium difficile infection: light at the end of the tunnel. Am J Clin Pathol. 2011;136(3):372380.
21. Kelly CP, LaMont JT. Clostridium difficile--more difficult than ever. N Engl J Med.
2008;359(18):1932-1940.
22. Monaghan T, Boswell T, Mahida YR. Recent advances in Clostridium difficile-associated disease.
Gut. 2008;57(6):850-860.
23. Hardy K, Price C, Szczepura A, et al. Reduction in the rate of methicillin-resistant Staphylococcus
aureus acquisition in surgical wards by rapid screening for colonization: a prospective, cross-over
study. Clin Microbiol Infect. 2010;16(4):333-339. Epub 2009/07/23.
24. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, Centers for Disease
Control and Prevention, National Institutes of Health. HHS Publication No. (CDC) 21-1112.
Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edition. Revised December 2009.
25. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of laboratory workers from
occupationally acquired infections. Approved Guideline-Fourth Edition. CLSI Document M29A4:Wayne, PA;CLSI, 2014.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
39
cobas® Cdiff Test
Wersja dokumentu
Informacje dotycz ce wersji dokumentu
Doc. Rev. 4.0
08/2016
®
Zaktualizowano ostrze enia o zagro eniach dotycz ce zestawów cobas 4800
®
System Sample Preparation Kit oraz cobas 4800 System Lysis Kit 1.
Poprawiono cz
Materia y opcjonalne:
Dodano „Roche P/N 07958056190; do ponownego zamykania przetworzonych
próbek w okr odennych probówkach typu Roche 13 ml”.
Pomini to Sarstedt 65.176.026.
Zaktualizowano opisy na stronie z ujednoliconymi symbolami, znajduj cej si na
ko cu ulotki do czonej do opakowania.
W razie jakichkolwiek pyta prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem
firmy Roche.
06979394001-04PL
Doc. Rev. 4.0
40

cobas Cdiff Test

Transkrypt

Podobne dokumenty

ISE Deproteinizer

Informacja o odczynnikach Analizatory, w których mogą być

Męska antykoncepcja w pigułce,Nowy marker wczesnego stadium

Informacja o odczynnikach Analizatory, w których mogą być

Informacja o odczynnikach Analizatory, w których mogą być

cobas® PCR Female Swab Sample Kit

mdnii - Roche

BARB - Roche

cobas® PCR Female Swab Sample Kit

Informacja o odczynnikach Analizatory, w których mogą być