Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
CD99, MIC2 Gene Product
Ewing’s Sarcoma Marker
Klon 12E7
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR057
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD99, MIC2 Gene Product, Ewing’s Sarcoma Marker,
klon 12E7, Ready-to-Use, (Link) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii, razem z aparatami
do barwienia Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji glejaków i wyściółczaków
ośrodkowego układu nerwowego oraz niektóre guzy z komórek wysp trzustkowych, zwłaszcza mięsaka
Ewinga (ES) i obwodowych pierwotnych guzów neuroektodermalnych (pPNET). Interpretacja kliniczna
dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie
odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii
choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
p30/32mic2, CD99
Streszczenie
i informacje ogólne
Gen MIC2 to gen pseudoautosomalny zlokalizowany na krótkich ramionach chromosomów X i Y. Produkty tego
genu to glikoproteiny o podobnej masie cząsteczkowej, oznaczone symbolami p30 i p32 (3–5). Proteiny
kodowane przez gen MIC2 są wrażliwe na neuraminidazę i proteazę. W krwinkach czerwonych gen MIC2 jest
regulowany przez związany z chromosomem X gen XG, przez co występuje ilościowy polimorfizm wyrażający się
zróżnicowaniem poziomów produktu genu MIC2 (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub
następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu,
6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do użycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i roztwór NaN3 o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: 12E7
Izotyp: IgG1, kappa
Immunogen
Komórki T ostrej białaczki limfoblastycznej (1)
Swoistość
Przeciwciało rozpoznaje produkty genu MIC2 i, co potwierdzają badania, wykazuje reaktywność podobną lub
identyczną jak przeciwciała monoklonalne HBA-71 i RFB-1 (2, 5).
Środki ostrożności
1.
2.
3.
4.
5.
Przechowywanie
(117378-001)
Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z
ołowiem lub miedzią wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika należy używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby
uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu.
Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania,
Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego
produktu, dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, należy wykonywać dodatnie
i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami
w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
307129PL_001 s. 1/3
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale nie
dostarczane
Przeciwciała mogą być stosowane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu. Optymalne wyniki uzyskuje się w
wyniku wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x)
(Link) (nr kat. K8000/K8004).
Odparafinowane skrawki: Zaleca się wstępną obróbkę utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie
skrawków tkankowych przy użyciu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera
Instrukcja użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX
Target Retrieval Solution, High pH (10x) (Link) (nr kat. K8000/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować
następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu:
97°C przez 20 (±1) minut; ochłodzić do 65°C. Przepłukać skrawki rozcieńczonym roztworem o temperaturze
pokojowej EnVision FLEX Wash Buffer (10x) (Link) (nr kat. K8000).
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe
należy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W
celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako
Silanized Slides (nr kat. S3003).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale nie
dostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W oprogramowaniu
Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące
wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika aparatu Autostainer
Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w używanym systemie Autostainer, należy skontaktować się z działem
wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w
temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez
patologów z różnym nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą
techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić
się, że działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki
jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować tymocyty kory
grasicy, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji
taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX
Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Produkty genu MIC2 wykazują ekspresję na błonach komórkowych niektórych limfocytów (ze
szpiku kostnego, węzłów chłonnych i śledziony), tymocytów korowych, komórek warstwy ziarnistej pęcherzyka
Graafa, większości komórek wysp Langerhansa, komórek wyściółki z ośrodkowego układu nerwowego, komórek
Sertoliego jąder oraz, w kilku przypadkach, komórek śródbłonka pojedynczych naczyń krwionośnych (5).
Tkanki nieprawidłowe: Badanie 70 guzów wykazało, że spośród tkanek nowotworowych tylko tkanki glejaka i
wyściółczaka ośrodkowego układu nerwowego oraz niektóre guzy z komórek wysp trzustkowych dawały odczyn
dodatni (5). Produkty genu MIC2 wykazują najsilniejszą ekspresję na błonach komórek mięsaka
Ewinga/obwodowych pierwotnych guzach neuroektodermalnych (pPNET), nowotworach stromalnych macicy i
guzach komórek podścieliska jajnika i sznurów płciowych. Tak więc, stwierdzenie obecności produktów genu
pozwala na odróżnienie tych guzów od innych nowotworów wykazujących obecność komórek okrągłych i
występujących w dzieciństwie i w wieku pokwitania (3, 5–10).
(117378-001)
307129PL_001 s. 2/3
Piśmiennictwo
1.
Levy R, et al. A human thymus-leukemia antigen defined by hybridoma monoclonal antibodies. PNAS USA
1979; 76:6552
2. Latron F, et al. Immunochemical characterization of the human blood cell membrane glycoprotein
recognized by the monoclonal antibodies 12E7. Biochem J 1987; 247:757
3. Fellinger EJ, et al. Biochemical and genetic characterization of the HBA71 Ewing's sarcoma cell surface
antigen. Cancer Res 1991; 51:336
4. Goodfellow PN and Tippett P. A human quantitative polymorphism related to the Xg blood groups. Nature
1981; 289:404
5. Ambros IM, et al. MIC2 is a specific marker for Ewing's sarcoma and peripheral primitive neuroectodermal
tumors. Cancer 1991; 67:1886
6. Fellinger EJ, et al. Immunohistochemical analysis of Ewing's Sarcoma cell surface antigen p30/32mic2. Amer
J Pathol 1991; 139:317
7. Rettig WJ, et al. Ewing's Sarcoma: new approaches to histogenesis and molecular plasticity. Lab Invest
1992; 66:133
8. Fellinger EJ, et al. Comparison of cell surface HBA71 (p30/32mic2), neuron specific enolase, and vimentin in
the immunohistochemical analysis of Ewing's Sarcoma of bone. Amer J Surg Pathol 1992; 16(8):746
9. Baker RJ, et al. Inhibin and CD99 (MIC2) expression in uterine stromal neoplasms with sex-cord-like
elements,Hum Pathol 1999, 30:671-679
10. Gordon MD, et al. CD99, keratin, and vimentin staining of sex cord-stromal tumors, normal ovary, and testis,
Mod Pathol 1998, 11:769-773
Wydanie 09/07
(117378-001)
307129PL_001 s. 3/3